As β-glicosidases são importantes enzimas do complexo celulolítico e são responsáveis pela hidrolise das ligações glicosídicas, atualmente existem várias aplicações biotecnológicas para está enzima, amplamente utilizada na fabricação de sucos e de vinhos. Nesse trabalho a β-glicosidase produzida pelo fungo termofilico Thermomyces lanuginosus foi caracterizada quanto ao efeito de pH, temperatura, etanol e glicose. A enzima apresentou atividade ótima no pH 5,5 e temperatura de 65°C, manteve-se estável em uma ampla faixa de pH 3,5-10,0 apresentando mais de 70 % da sua atividade original. Nos ensaios de termoestabilidade após 1 hora de incubação a enzima permaneceu estável até 55°C e reteve mais de 60% da sua atividade a 65°C. O etanol em concentrações de 5 a 10% aumentou o potencial catalítico da β-glicosidase devido a atividade glicosil-transferase. A enzima foi inibida por glicose mantendo 50 % de sua atividade original com 60 mM de glicose na reação, a inibição exercida pela glicose foi do tipo competitiva, considerando que o aumento na concentração de substrato reverteu sua atividade original.