info:eu-repo/semantics/article
Otimização de protocolo de extração de DNA genômico para acácia-negra
Optimization of genomic DNA extraction protocol for black wattle
Autor
Maximo, Yasmin Imparato
Ikeda, Angela Cristina
Flôres Júnior, Paulo César
Alcantara, Giovana Bomfim de
Higa, Antonio
Institución
Resumen
Considerando-se que a atual tendência do melhoramento florestal é a integração das técnicas clássicas com as de análise genética molecular, faz-se necessária a obtenção de protocolos de extração de DNA genômico ajustados a cada espécie estudada. O objetivo do trabalho foi determinar o efeito de diferentes adaptações no protocolo de extração de DNA genômico CTAB para acácia-negra. Foram testados diferentes componentes na fase de extração orgânica: clorofórmio, fenol e proteinase K, além da aplicação de RNase após a fase de precipitação e limpeza do DNA. Também, foi investigada a eficiência destes tratamentos em amostras de folíolos frescas ou armazenadas em baixa temperatura durante sete dias. Foi verificada a presença de DNA de todas as amostras submetidas à extração pelo protocolo de CTAB com os diferentes tratamentos. O tempo de armazenamento das amostras não influenciou na integridade do DNA, entretanto, foi possível observar que a adição de RNase melhorou a qualidade do DNA extraído. Deste modo, sugere-se a utilização do protocolo CTAB com uso de clorofórmio e RNase, com amostras frescas ou armazenadas em baixas temperaturas. As the integration of classic techniques and molecular genetics analysis is a current trend in forest tree improvement, a protocol for DNA extraction adapted for the study of each species is necessary. The objective of this study was to determine the effect of different adaptations in the CTAB protocol of genomic DNA extraction for black wattle. The following components were tested after the organic extraction phase: chloroform, phenol formaldehyde, and proteinase K. Also, the effects of applying RNase after the precipitation and cleaning phase were analyzed. The efficiency of these treatments was evaluated on fresh leaflets samples, as well as on samples refrigerated for seven days. The authors observed that all treatments enabled the successful genomic DNA extraction using the CTAB protocol. Moreover, storage did not affect the DNA integrity; adding RNase, however, resulted in an enhanced extracted DNA. Therefore, the use of chloroform and RNase according to the CTAB protocol on both fresh and refrigerated samples is suggested.