Cryptococcus laurentii is a rare human pathogen ubiquitous in nature. This study aims to evaluate the disk diffusion method for testing fluconazole susceptibility of C. laurentii, and moreover, to assess the minimal fungicidal concentration (MFC) by the broth microdilution method. Eleven isolates of environmental C. laurentii complex were employed to determine the susceptibility to fluconazole by disk diffusion and by broth microdilution methods according to CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) guidelines and to determine the MFC by broth microdilution technique. Thedisk diffusion method indicated four susceptible, three susceptible-dose dependent and four resistant isolates while by the broth microdilution method 10 isolates were defined as susceptible and one susceptible-dose dependent. The agreement between the methods was 36.4%. One isolate showed MFC of 8 ?g/mL and two of 64 ?g/mL. Although only a small number of isolates were studied, results suggested that the disk diffusion method was not adequate to determine in vitro susceptibility to fluconazole for C. laurentii isolates, and that fluconazole, while it is a fungistatic antifungal, may present in vitro fungicidal activity for some isolates.Cryptococcus laurentii é um patógeno humano raro, ubíquo na natureza. O objetivo deste estudo foi avaliar a aplicação do método de difusão do disco para determinar a sensibilidade ao fluconazol de isolados de C. laurentii e determinar a concentração fungicida mínima (CFM) do fluconazol. Foi determinada a sensibilidade ao fluconazol pelos métodos de difusão do disco e microdiluição em caldo de 11 isolados de C. laurentii, de acordo com CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), e a CFM pelo método de microdiluição em caldo. O método de difusão do disco mostrou quatro isolados sensíveis, três sensíveis dose-dependentes e quatro resistentes, enquanto que pelo método de microdiluição, 10 isolados foram sensíveis e um sensível dose-dependente. A concordância entre os dois métodos foi de 36,4%. Um isolado apresentou CFM de 8 ?g/mL e dois de 64 ?g/mL. Embora o número de isolados estudados seja pequeno, os resultados sugerem que o método de difusão do disco não deve ser usado na determinação da sensibilidade in vitro dos isolados de C. laurentii ao fluconazol, e apesar de ser uma droga fungistática, o fluconazol pode apresentar atividade fungicida in vitro para alguns isolados do complexo C. laurentii.