Dissertação
Purificação de celulase produzido por Aspergillus niger utilizando sistema bifásico aquoso peg/citrato e aplicação em hidrólise de biomassa lignocelulósica
Registro en:
VARANDAS, Vinícius Silva. Purificação de celulase produzido por Aspergillus niger utilizando sistema bifásico aquoso peg/citrato e aplicação em hidrólise de biomassa lignocelulósica. 2020. 90 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) – Universidade Federal de Sergipe, São Cristóvão, 2020.
Autor
Varandas, Vinícius Silva
Institución
Resumen
Cellulases are high value added enzymes in the market because they act in synergy to release
sugars, of which glucose is the one that arouses the greatest industrial interest. However, the
high cost of producing and purifying these enzymes is a limiting factor for the development of
this technology. The objective of this study was to purify Aspergillus niger cellulase in a
PEG/citrate aqueous biphasic system (SAB) for lignocellulosic biomass hydrolysis. The
determination of the liquid-liquid equilibrium data of the PEG / Citrate systems showed that
the methodologies employed were efficient in their characterization, where it was possible to
verify that the tie-lines of the phase diagrams were practically parallel, obtaining average
angular coefficients for each system. The purification of CMCase showed that it has a
preference for the bottom phase (rich in salt), with a minimum partition coefficient of 0.31,
purification factor of 7.73 and recovery yield of 90.69%. The operating conditions that led to
this optimum were with PEG 6000, volume ratio of 0.25 and TLL of 32.3, the last two being
the variables that most influenced statistically the enzyme partition. As with the other proteins,
FPase showed a preference for the top phase (polymer rich), with the partition point of 2.69,
recovery yield of 86.79% and purification factor of 2.80 as the optimal point in operating
conditions with PEG 4000, volume ratio of 0.75 and TLL of 32.3. Leaf residues are viable for
both enzyme production and sugar production. In the hydrolysis of this lignocellulosic biomass,
the purified cellulase allowed a final concentration of 6.07 g/L of glucose in the reaction
medium and a maximum productivity of 0.872 g/L.h against 4.89 g/L and 0.650 g/L.h obtained
using the extract. which shows that cellulase purification in SABs is an important strategy in
enzyme recovery without causing loss of catalytic activity. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq As celulases são enzimas de alto valor agregado no mercado em virtude de atuarem em sinergia
para a liberação de açúcares, dos quais, glicose, é o que desperta maior interesse industrial.
Entretanto, o alto custo de produção e purificação dessas enzimas é um fator limitante ao
desenvolvimento dessa tecnologia. O objetivo deste estudo foi purificar celulase de Aspergillus
niger em sistema bifásico aquoso (SAB) PEG/citrato visando à aplicação em hidrólise de
biomassa lignocelulósica. A determinação dos dados do equilíbrio liquido-líquido dos sistemas
PEG/Citrato mostrou que as metodologias empregadas foram eficientes na caracterização dos
mesmos, onde foi possível verificar que as tie-lines dos diagramas de fases eram praticamente
paralelas, podendo-se obter coeficientes angulares médios para cada sistema. Através dos dados
do equilíbrio, foi construído um planejamento fatorial 33
com massa molar do PEG, razão de
volume (Vr) e comprimento de tie-line (TLL) como variáveis independentes. A purificação da
CMCase demonstrou que a mesma foi particionada preferencialmente na fase inferior (rica em
sal), apresentando um coeficiente de partição mínimo de 0,31, fator de purificação de 7,73 e
rendimento de recuperação de 90,69%. As condições operacionais que levaram a este ótimo
foram com PEG 6000, razão de volume de 0,25 e TLL de 32,3, sendo essas duas últimas as
variáveis que mais influenciaram estatisticamente na partição da enzima. Assim como as
demais proteínas, a FPase particionou-se preferencialmente na fase superior (rica em polímero),
apresentando como ponto ótimo um coeficiente de partição de 2,69, rendimento de recuperação
de 86,79 % e fator de purificação de 2,80, em condições operacionais de PEG 4000, razão de
volume de 0,75 e TLL de 32,3. Os resíduos de folhas mostram-se viáveis tanto para a produção
de enzima quanto para a produção de açúcares fermentescíveis. Na hidrólise desta biomassa
lignocelulósica, a celulase purificada possibilitou uma concentração final de 6,07 g/L de glicose
no meio reacional e produtividade máxima de 0,872 g/L.h frente a 4,89 g/L e 0,650 g/L.h
obtidas utilizando o extrato bruto, o que demonstra que a purificação das celulases nos SABs é
uma importante estratégia na recuperação da enzima sem provocar perda de atividade catalítica. São Cristóvão