Tese
Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Pseudomonas spp. do tomateiro tutorado no Brasil
Phenotypic and genotypic characterization of Pseudomonas spp. isolates from staked tomato in Brazil
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Autor
Mota, Lara Caroline Borges Moreira Mota
Institución
Resumen
The bacterial incidence caused by the bacteria genus Pseudomonas cause considerable losses
in tomato yield. This genus has population the isolates with great genetic diversity, it can
directly influence the pathogen aggressiveness level. The objective of this work was to
characterize 43 isolates of Pseudomonas spp. obtained from samples of tomato stems or
leaves with symptoms of pith necrosis or leaf lesions, respectively, regarding phenotypic and
genotypic aspects. Bacterial isolates were morphological and biochemically characterized by
Gram tests, anaerobic growth, King B medium and LOPAT tests. Molecular analysis was
performed by rep-PCR (REP, ERIC and BOX primers), specific primers and genetic
sequencing of the 16S region of from isolates part. To evaluate aggressiveness, two assays
were conducted, one using the isolates from the stem and the another from the tomato leaf. In
both experiments healthy tomato plants cv. Santa Clara VF5600 were inoculated with
bacterial suspension at a concentration 1.0 x 108 CFU mL-1, and the severity of the disease
was evaluated and the Area Under The Disease Progression Curve calculated. Morfologically,
all colonies were circular and bright, most then of transparent and with smooth edges. The
elevation varied between straight, slightly elevated and convex, and the coloration in shades
of straw color. Biochemically, the isolates were classified into groups II, IVb, Va and Vb the
LOPAT tests, one isolate as P. corrugata and two biochemically undetermined isolates.
Molecularly the isolates shoued high genetic diversity by rep-PCR, and it was not possible to
relate the molecular characteristics with the place of origin. With the specific primers only the
UFU B39 isolate was identified as P. corrugata. Genetic sequencing confirmed the identified
of several isolates such as P. putida and P. fluorescens, and also P. syringae pv. tomato that
presented biochemical variation. In the aggressiveness tests in the stem, the isolates UFU B39
and UFU H24 were the most aggressive, and in the leaf test there was no difference in the
isolates aggressiveness. It was concluded that the isolates showed low morfological variation,
high biochemical and molecular variation and different levels of stem aggressiveness. This is
the first report of P. putida and P. fluorescens causing disease in staked tomato plants in
Brazil. FAU - Fundação de Apoio Universitário Tese (Doutorado) A incidência de bacterioses ocasionadas pelas bactérias do gênero Pseudomonas causam
perdas consideráveis na produtividade no tomateiro. Esse gênero possui populações de
isolados com grande diversidade genética, o que pode influenciar diretamente no nível de
agressividade do patógeno. O objetivo deste trabalho foi caracterizar 43 isolados de
Pseudomonas spp. obtidos de amostras de hastes ou folhas de tomateiro com sintomas de
necrose da medula ou lesões foliares, respectivamente, quanto à aspectos fenotípicps e
genotípicos. Os isolados bacterianos foram caracterizados morfológica e bioquimicamente
pelos testes de Gram, crescimento anaeróbico, meio King B e testes LOPAT. A análise
molecular foi realizada por rep-PCR (iniciadores REP, ERIC e BOX), iniciadores específicos
e sequenciamento genético da região 16S de parte dos isolados. Para avaliar a agressividade,
foram conduzidos dois experimentos, um com os isolados provenientes da haste e outro da
folha do tomateiro. Em ambos os experimentos as plantas sadias de tomate cv. Santa Clara
VF5600 foram inoculadas com suspensão bacteriana na concentração 1,0 x 108 UFC mL-1,
sendo avaliada a severidade da doença com escala diagramática e calculada a Área Abaixo da
Curva de Progresso da Doença. Quanto à morfologia, todas as colônias foram circulares e
brilhantes, a maioria transparente e com bordas lisas. A elevação variou entre reta, levemente
elevada e convexa, e a coloração em nuances de cor palha. Bioquimicamente, os isolados
foram classificados nos grupos II, IVb, Va e Vb dos testes LOPAT, um isolado como P.
corrugata e dois isolados bioquimicamente não determinados. Molecularmente, apresentaram
grande diversidade genética por rep-PCR, não sendo possível relacionar as características
moleculares com o local de origem. Com os iniciadores específicos apenas o isolado UFU
B39 foi identificado como P. corrugata. No sequenciamento genético foi possível confirmar a
identidade de vários isolados como sendo P. putida e P. fluorescens, bem como P. syringae
pv. tomato, os quais apresentaram variação bioquímica. Nos testes de agressividade na haste
os isolados UFU B39 e UFU H24 foram os mais agressivos, enquanto nos testes de folha não
foi observada diferença na agressividade dos isolados. Dessa forma, conclui-se que os
isolados apresentaram pouca variação morfológica, muita variação bioquímica e molecular e
diferentes níveis de agressividade na haste. Este é o primeiro relato de P. putida e P.
fluorescens causando doença no tomateiro tutorado no Brasil. 2022-02-21