Dissertação
Padrão de metilação dos genes XIST e IGF2 em ovócitos de vacas nelore (Bos taurus indicus) em diferentes fases da ovogênese
Padrão de metilação dos genes XIST e IGF2 em ovócitos de vacas nelore (Bos taurus indicus) em diferentes fases da ovogênese;
Methylation pattern of the xist and igf2 genes in oocytes from nelore cows (Bos taurus indicus) during oogenesis;
Methylation pattern of the xist and igf2 genes in oocytes from nelore cows (Bos taurus indicus) during oogenesis
Registro en:
Autor
Mendonça, Anelise dos Santos
Institución
Resumen
DNA methylation is one of the most studied epigenetic events
and is responsible for epigenetic reprogramming which occurs during
gametogenesis. Understanding how this reprogramming occurs in oogenesis is
important to comprehend physiologic and genetic aspects involved in female
gametogenesis in order to create parameters for oocyte competence and,
consequently, to improve the in vitro embryo production, maximizing the use of
gametes and improving production rates. The aim of this study was to evaluate the
DNA methylation pattern in two DMRs involved in the control of XIST and IGF2
genes expression in oocytes from pre antral and antral follicles of Nellore cows. The
extracted DNA from oocytes was treated with sodium bisulphite and amplified to
XIST and IGF2 genes, which was cloned into DH5 cells, and then purified and
sequenced. The methylation patterns found for oocytes of primordial, secondary,
incompetent antral and competent antral follicles were 91.59 ± 6.4%, 85.70 ± 19.6%,
91.25 ± 7.2% and 92.58 ± ± 11.7%, respectively for XIST gene and 60.56 ± 29.1%,
59.68 ± 34.6%, 58.21 ± 33.0% and 67.47 ± 27.8%, respectively for IGF2 gene. XIST
is more methylated than IGF2 gene (P<0,001). The hypermethylated pattern of XIST
gene suggests that this event may be responsible for epigenetic reactivation of the X
chromosome during oogenesis, which is observed in the final oocyte. The IGF2 gene
was also hypermethylated, a different pattern found in matured oocytes. This
suggests that the analyzed regions undergo differents epigenetic reprogramming
processes during oogenenesis, which are only completed with oocyte maturation. Mestre em Ciências Veterinárias A metilação do DNA é um dos eventos epigenéticos mais
conhecidos, sendo um dos responsáveis pela reprogramação epigenética que
acontece durante a gametogênese. Entender como ocorre essa reprogramação na
ovogênese é importante para a compreensão de aspectos fisiológicos e genéticos
envolvidos na gametogênese feminina com o intuito de criar parâmetros para a
competência ovocitária e, consequentemente, melhorar a produção in vitro de
embriões, maximizando a utilização de gametas e melhorando as taxas de
produção. Nesse trabalho objetivou-se determinar o padrão de metilação em duas
DMRs envolvidas no controle da expressão dos genes XIST e IGF2 em ovócitos de
folículos pré-antrais e antrais de vacas Nelore. O DNA extraído dos ovócitos foi
tratado com bissulfito de sódio e amplificado para os genes XIST e IGF2, o qual foi
clonado em células DH5, sendo em seguida purificado e sequenciado. Foram
encontrados padrões de metilação para ovócitos de folículos primordiais,
secundários finais, antrais incompetentes e antrais competentes de 91,59 ± 6,4%,
85,70 ± 19,6%, 91,25 ± 7,2% e 92,58 ± 11,7%, respectivamente para o gene XIST e
60,56 ± 29,1%, 59,68 ± 34,6%, 58,21 ± 33,0% e 67,47 ± 27,8%, respectivamente
para o gene IGF2, sendo que o gene XIST está mais metilado que o gene IGF2
(P<0,001). O padrão hipermetilado para o gene XIST sugere que pode ser este o
evento epigenético responsável pela reativação do cromossomo X durante a
ovogênese, caráter que é observado no ovócito MII. O gene IGF2 também
apresentou um padrão hipermetilado, diferente do encontrado no ovócito maturado.
Isso sugere que as regiões analisadas sofrem processos de reprogramação
epigenética diferentes durante a ovogênese, os quais provavelmente se completam
somente com a maturação ovocitária.