Trabalho de Conclusão de Curso
Seleção espermática em três espécies de cervos: Mazama americana (Erxleben, 1777), Mazama gouazoubira (Fischer, 1814) e Mazama nemorivaga (Cuvier, 1817)
Sperm selection in three species of deer: Mazama americana (Erxleben, 1777), Mazama gouazoubira (Fischer, 1814) and Mazama nemorivaga (Cuvier, 1817)
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VIEIRA, Caroline Silva. Seleção espermática em três espécies de cervos: Mazama americana (Erxleben, 1777), Mazama gouazoubira (Fischer, 1814) e Mazama nemorivaga (Cuvier, 1817). 2021. 32 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Medicina Veterinária) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2021.
Autor
Vieira, Caroline Silva
Institución
Resumen
This study aimed to select high quality sperm, through sperm separation by density gradient centrifugation (DGC) and by magnetic activation cell separation (MACS), in fresh semen from deer of the genus Mazama. Semen from six deer was collected using the electroejaculation technique after chemical restraint. The following analyzes were performed: motility and vigor, morphology (smear stained with Congo red) and supravital test (eosin-nigrosin), in addition to DGC and MACS. For DGC, Percoll® was used with 20 x 106 cells in a 400 μl gradient of Percoll® at 90% and 45%. In MACS, 10 x 106 cells were used with the pellet resuspended in 150 μl of HEPES with 20 μl of nanoparticles linked to annexin V, incubation for 15 minutes and filtration in the MiniMACS magnetic separation column, and the filtered non-apoptotic portion was collected for analysis. The results obtained for motility were 75 ± 7.1%, 71.7 ± 10.8% and 8.3 ± 4.1% in fresh semen, post DGC and post MACS, respectively. For vigor, the values obtained were 2.8 ± 0.4% for fresh semen, 2.5 ± 0.4% after DGC and 0.7 ± 0% after MACS. Total defects reduced after the selection techniques used (44.5 ± 19.6% in fresh semen, 27.3 ± 18.0 after DGC and 24.8 ± 16.4 after MACS). The individual defects that had the greatest reduction after the selection techniques were curled tail (15.5% in fresh semen, 6.2% post DGC and 4.8 post MACS) and curled tail (7.3% in fresh semen, 1 .4 post DGC and 2.0 post MACS). There was also a reduction in the number of cells with damaged plasma membrane in both techniques, and, in relation to fresh, MACS reduced by 25% and DGC by 9%. The findings suggest that these sperm separation techniques are efficient in producing high quality semen samples in deer. Pesquisa sem auxílio de agências de fomento Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) Este estudo teve por objetivo selecionar espermatozoides de alta qualidade, através da separação espermática por centrifugação em gradientes de densidade (DGC) e por separação celular por ativação magnética (MACS), em sêmen fresco de cervos do gênero Mazama. O sêmen de seis cervos foi coletado pela técnica de eletroejaculação após a contenção química. Foram realizadas as seguintes análises: motilidade e vigor, morfologia (esfregaço corado com vermelho congo) e teste supravital (eosina-nigrosina), além do DGC e MACS. Para DGC utilizou-se Percoll® com 20 x 106 de células em gradiente de 400 μl de Percoll® a 90% e 45%. Na MACS utilizou-se 10 x 106 de células com o pellet ressuspenso em 150 μl de HEPES com 20 μl de nanopartículas ligadas a anexina V, incubação por 15 minutos e filtração na coluna de separação magnética MiniMACS, e a porção não apoptótica filtrada foi coletada para análise. Os resultados obtidos para motilidade foram 75 ± 7,1%, 71,7 ± 10,8% e 8,3 ± 4,1% em sêmen fresco, pós DGC e pós MACS, respectivamente. Para vigor os valores obtidos foram 2,8 ± 0,4% para sêmen fresco, 2,5 ± 0,4% pós DGC e 0,7 ± 0% pós MACS. Os defeitos totais reduziram após as técnicas de seleção empregadas (44,5 ± 19,6% em sêmen fresco, 27,3 ± 18,0 pós DGC e 24,8 ± 16,4 pós MACS). Os defeitos individuais que tiveram maior redução após as técnicas de seleção foram cauda dobrada (15,5% em sêmen fresco, 6,2% pós DGC e 4,8 pós MACS) e cauda enrolada (7,3% em sêmen fresco, 1,4 pós DGC e 2,0 pós MACS). Houve também uma redução do número de células com membrana plasmática lesada em ambas as técnicas, sendo que, em relação ao fresco, a MACS reduziu em 25% e a DGC em 9%. Os achados sugerem que essas técnicas de separação espermáticas são eficientes na produção de amostras de sêmen de qualidade elevada em cervos.
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