Dissertação
Diagnóstico molecular da leishmaniose tegumentar americana em pacientes atendidos no Centro de Referência em hanseníase e dermatologia sanitária da Universidade federal de Uberlândia, CREDESH-UFU.
Molecular diagnosis of American cutaneous leishmaniasis in patients treated at the Leprosy and Sanitary Dermatology Reference Center of the Federal University of Uberlândia, CREDESH- UFU.
Registro en:
Autor
Silva, Fernanda Cristina Assis
Institución
Resumen
Leishmaniasis represents a complex of parasitic diseases with high rates of
morbimortality which are extremely associated with poverty .The definitive diagnosis of
ATL is based on clinical and epidemiological data associated to the laboratory
diagnosis. PCR has proved to be a valuable tool in the diagnosis of leishmaniasis,
because it is a faster and more sensitive than conventional methods, and can identify the
species in different clinical samples. The objective of this study was to evaluate the
efficacy of PCR for the diagnosis of ACL, to identify Leishmania species in samples
from patients attended by the National Reference Center on Leprosy and Sanitary
Dermatology, Federal University of Uberlândia. A total of 37 skin samples collected
from patients with skin lesions suggestive of ATL and four suspects were submitted to
the diagnosis of IHQ and PCR and subsequent PCR-RFLP analysis of positive samples.
A total of 37 skin samples collected from patients with cutaneous lesions suggestive of
ATL were submitted to IHC and PCR diagnosis, following by PCR-RFLP analysis of
positive samples. Ten samples positive for leprosy and negative for Leishmania
(Montenegro Skin test and IHC negative results) were used for test the absence of
primers annealing with Mycobacterium leprae. By consensus a result was considered as
positive when at least three of the five diagnostic techniques tested were positive,
resulting in 30 (73%) samples considered positives and 11 as negative (27%). IHC
showed the lower sensitivity and NPV when compared with the other three PCR tests,
but it showed high specificity and PPV. The values of the sensitivity, specificity, PPV
and NPV for the primers 13A/13B and L150/152 were 80% and 100%, and 90% and
100%, 100 and 100%, 50% and 66.6%, respectively. The primers HSP70 and
LITS1/L5.8S present similar results reaching 100% of sensitivity, specificity, NPV and
PPV. The four PCR assays presented better results for ATL diagnosis when compared
to the IHC and the others methods routinely used. The identification of species through
PCR-RFLP was able to identify the four species proposed in this study L.braziliensis, L.
amazonensis, L.guyanensis and L.infantum. In conclusion, ITS1 and HSP70 PCR-RFLP
assays were able to diagnosing to identify the ATL causative agent with high sensitivity
and specificity, however, the HSP70 PCR-RFLP showed better applicability in the
diagnostic routine of ATL in Brazil due to its high sensitivity, specificity and
operational characteristics. Dissertação (Mestrado) A leishmaniose representa um complexo de doenças parasitárias com altas taxas de
morbimortalidade que estão extremamente associadas à pobreza. O diagnóstico
definitivo de LTA é baseado em dados clínicos e epidemiológicos associados ao
diagnóstico laboratorial. O PCR provou ser uma ferramenta valiosa no diagnóstico da
leishmaniose, porque é mais rápido e mais sensível do que os métodos convencionais e
pode identificar as espécies em diferentes amostras clínicas. O objetivo deste estudo foi
avaliar a eficácia da PCR para o diagnóstico da LTA, identificar as espécies Leishmania
em amostras de pacientes atendidos pelo Centro de Referência Nacional em Hanseníase
e Dermatologia Sanitária da Universidade Federal de Uberlândia. Um total de 37
amostras de pele coletadas de pacientes com lesões cutâneas sugestivas de LTA foram
submetidas ao diagnóstico de IHC e PCR e posterior análise de PCR-RFLP de amostras
positivas. Foram utilizadas dez amostras positivas para Hanseníase e negativas para
Leishmania (teste de pele de Montenegro e resultados negativos de IHC) para testar a
ausência de anelamento dos iniciadores com Mycobacterium leprae. Por consenso, um
resultado foi considerado positivo quando pelo menos três das cinco técnicas de
diagnóstico testadas foram positivas, resultando em 30 (73%) amostras consideradas
positivas e 11 como negativas (27%). A IHC mostrou menor sensibilidade e NPV
quando comparado com os outros três testes de PCR, mas apresentou alta especificidade
e PPV. Os valores de sensibilidade, especificidade, PPV e VPL para os iniciadores 13A
/ 13B e L150 / 152 foram de 80% e 100% e 90% e 100%, 100 e 100%, 50% e 66,6%,
respectivamente. Os primers HSP70 e LITS1 / L5.8S apresentam resultados
semelhantes atingindo 100% de sensibilidade, especificidade, VPL e PPV. Os quatro
ensaios de PCR apresentaram melhores resultados para o diagnóstico de ATL quando
comparados ao IHC e outros métodos rotineiramente utilizados. A identificação de
espécies através de PCR-RFLP foi capaz de identificar as quatro espécies propostas
neste estudo L.braziliensis, L. amazonensis, L.guyanensis e L.infantum. Em conclusão,
os ensaios PCR-RFLP de ITS1 e HSP70 foram capazes de diagnosticar e identificar o
agente causador de LTA com alta sensibilidade e especificidade, no entanto, o HSP70
PCR-RFLP mostrou maior aplicabilidade na rotina diagnóstica de LTA no Brasil devido
à sua alta sensibilidade, especificidade e características operacionais.