Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Os resultados deste trabalho mostram a comparação de ensaios com cérebro bovino submetidos à 3 condições, mantendo o pH 8,0 acrescentado ou não pirofosfato 100 mM e alterando o pH para 9,0. Foi homogeneizado cerca de 1 g de cérebro em 10 mL de tampão de extração. O homogeneizado foi centrifugado a 45.000 x g durante 40 minutos a 4 ° C. A fração SI, dos três ensaios foi aplicada em coluna Q-Sepharose. Para amostras com pH 8,0 obtivemos uma retenção de grande número de polipeptídios e conseqüentemente proteína, juntamente com polipeptídio com mobilidade em SDS semelhante à miosina V. Nos eluatos com NaCI 250 mM observamos dentre outros o polipeptídio de interesse com pequena atividade ATPásica que não é recuperada após diálise. Ao passo que polipeptídio em torno de 83, 31, 30 e 23 kDa juntamente com outros de 43 e 47 kDa são evidentes nos eluatos com 500 mM de NaCI, sem atividade Mg2+-ATPásica. O ensaio com pH 9,0 obteve similar perfil em SDS-PAGE, contudo houve pouca retenção de proteínas e os eluatos com 250 mM de NaCI mesmo tendo um polipeptídio com peso molecular igual a miosina V, não foi verificado atividade ATPásica. Se tratando do ensaio com pH 8,0 e pirofosfato houve pouca retenção de polipeptídios. Neste caso apenas os eluatos com 500 mM de NaCI obtiveram resultados expressivos e similares aos dois ensaios anteriores, salve as exceções dos polipeptídios em torno de 66 e 43 kDa. O eluatos do ensaio com pH 8,0 e pirofosfato não obtiveram atividade, como se era esperado. No caso do ensaio com pH 9,0 foi reaplicado o void novamente em coluna Q-sepharose obtendo quase completa retenção de proteínas e atividade nula, com concomitante retenção do polipeptídio com motilidade similar a miosina V.