Dissertação
Identificação de peptídeos sintéticos ligantes à imunoglobulinas G de pacientes com neurocisticercose por Phage display
Registro en:
RIBEIRO, Vanessa da Silva. Identificação de peptídeos sintéticos ligantes à imunoglobulinas G de pacientes com neurocisticercose por Phage display. 2009. 84 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2009.
Autor
Ribeiro, Vanessa da Silva
Institución
Resumen
Neurocysticercosis (NC), presence of Taenia solium metacestodes in the central nervous
system is the most serious form of cysticercosis and is the cause of epilepsy in countries under
development. The improvement of immunodiagnostic tests which use recombinant antigens is
importance because of the difficulty of obtaining parasites from naturally infected pigs for the
preparation of metacestodes T. solium metacestodes crude antigen. The aim of this study was
to select phagotopes by phage display peptide library specific to IgG present in serum samples
from patients with NC and confirm the immunoreactivity from the selected phagetopes in the
ELISA test for the diagnosis of human neurocysticercosis in serum samples. We used in the
selection procedure a phage display peptide library in a selection strategy against the
immunoglobulins (IgG) purified from serum samples positively diagnosed for NC, other
parasitoses and apparently health individuals. The DNA sequences corresponding to the
inserts of the selected phage clones were sequenced, translated and analyzed by
bioinformatics. ELISA tests were performed with the ten phagetopes selected against the three
groups of patients (NC, other parasitoses and healthy). The binding specificities of the
recombinant phages to the pool of serum samples were analyzed by competitive ELISA.
Peptides showed significant similarities with important proteins from T. solium. All
phagetopes presented satisfactory sensitivities and specificities in the ELISA test, varying
from 52.5% to 100% and 86.3% to 100%, respectively. Some phagetopes did not reacted with
serum samples from patients infected with Echinococcus granulosus, what is an advance since
this cross reaction is very commonly reported. The recognition data indicated that the selected
peptides could indeed mimic the epitopes on T. solium and bind specifically to the pool of
serum with NC. We concluded that the identified phage clones displayed specific peptides to
NC, and are potential biomarkers for NC diagnosis in serum samples. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas A neurocisticercose (NC), resultado da presença dos metacestódeos de T. solium no sistema
nervoso central constitui a forma mais grave da cisticercose, sendo a principal causa de
epilepsia nos países em desenvolvimento. O aprimoramento de testes imunodiagnósticos que
utilizem antígenos recombinantes se faz necessário diante da dificuldade de obtenção de
suínos naturalmente infectados com metacestódeos de T. solium, para a produção de antígeno.
O objetivo deste estudo foi identificar peptídeos recombinantes ligantes à imunoglobulinas G
de pacientes com neurocisticercose por phage display, a partir de uma biblioteca randômica
de peptídeos e verificar a imunorreatividade dos fagos selecionados pelo método
imunoenzimático ELISA. Uma biblioteca de peptídeos randômicos expressados em
bacteriófagos filamentosos foi utilizada numa estratégia de seleção contra as imunoglobulinas
(IgG) purificadas de soro de pacientes positivos para NC, outras parasitoses e aparentemente
saudáveis. As seqüências do DNA correspondente aos insertos dos fagos selecionados foram
seqüenciados, traduzidos e analisados por bioinformática. Foram realizados testes de ELISA
com os dez fagos selecionados contra os três grupos de pacientes (NC, outras parasitoses e
saudáveis). A especificidade de ligação dos fagos ao pool de soros foi analisado por ELISA
de competição. Os peptídeos apresentaram similaridades significativas com proteínas
importantes do parasito T. solium. Todos os clones apresentaram eficiência de diagnóstico
satisfatórias no teste ELISA variando de 90 a 95%. Alguns clones não apresentaram
reatividade com o soro de pacientes infectados com Echinococcus granulosus, o que
representa um grande avanço uma vez que esta reatividade cruzada é muito freqüente. Os
dados de reconhecimento no teste de competição indicaram que os peptídeos selecionados
podem mimetizar epítopos de T. solium e se ligar especificamente ao pool de soro de
pacientes com NC. Conclui-se que os fagos identificados apresentaram peptídeos específicos
para NC e são potenciais biomarcadores no diagnóstico da doença em amostras de soro.