Tese
Implicações clínicas de um anticorpo recombinante (Fab) construído e selecionado por Phage display e avaliação do papel das citoqueratinas no câncer de mama
Registro en:
Autor
Araújo, Thaise Gonçalves de
Institución
Resumen
Background
Currently there are no biomarkers capable of predicting the outcome or avoiding
unnecessary treatment in breast cancer (BC), and diagnostic markers have
variable behavior, suggesting a higher complexity and heterogeneity of existing
BC subtypes. We have characterized the biological target of a new Fab antibody in
BC tissues and assessed its clinical relevance in diagnostics, disease staging and
prognosis.
Methods
A Fab antibody combinatorial library was constructed by mixing transcripts from
twenty patients with invasive ductal carcinoma. Phage Display selections against
BC tissues from all stages led to the breast specific FabC-4 antibody, which was
thoroughly investigated by immunohistochemistry (IHC) in a tissue microarray
generated by a cohort of 232 BC patients. The FabC-4 ligand was determined by
mass spectrometry.
Results
The FabC-4 was selected based on its high reactivity to all BC stages and
discrimination power from benign diseases and healthy controls, with significant
sensitivity and specificity (70% and 62% respectively). Its higher tissue expression
was associated with aggressive BCs; i.e., younger age, lack of progesterone
receptor, higher histological grades and non-luminal phenotypes, and it also
identified a subset of good prognostic triple-negative BCs. Its biological target,
identified through mass spectrometry, is a conformational epitope of Cytokeratin-
10 (CK10).
Conclusion
A CK10-epitope specific antibody is the first bi-functional highly specific tissue
biomarker for BC diagnosis and histopathological classification, which was also
shown to be associated with aggressive BCs. In addition, the antibody identified a
subset of triple negative BCs with good prognosis. Its role in BCs should be
addressed in future studies. Doutor em Genética e Bioquímica Atualmente não existem biomarcadores capazes de predizer o resultado ou evitar
tratamentos desnecessários no câncer de mama (BC), e os marcadores de
diagnóstico apresentam um comportamento variável, o que sugere uma maior
complexidade e heterogeneidade dos subtipos de BC existentes. Nós
caracterizamos como alvo biológico um novo anticorpo Fab em tecidos BC e
avaliamos sua relevância clínica para o diagnóstico, prognóstico e estadiamento
da doença.
Uma biblioteca combinatória de anticorpos Fab foi construída utilizando uma
mistura dos transcritos de 20 pacientes com carcinoma ductal invasivo. A seleção
por phage display contra tecidos BC de todos os estadiamentos da mama
identificou o anticorpo FabC-4, que foi intensamente investigado por
imunohistoquímica (IHC) em um tissue microarray gerado de uma coorte com 232
pacientes BC. O ligante de FabC-4 foi determinado por espectrometria de
massas.
O FabC-4 foi selecionado baseado na sua elevada reatividade em todos os
estádios de BC e seu poder de diferenciar de doenças benignas e controles
saudáveis, com sensibilidade e especificidade significativa (70% e 62%,
respectivamente). A sua expressão mais elevada em tecidos foi associada com
BCs agressivos; por exemplo, menor idade, ausência do receptor de
progesterona, graus histológicos maiores e fenótipos não-luminais e também foi
identificado um subgrupo com bom prognóstico nos BCs triplo-negativo. O alvo
biológico do FabC-4, identificado por espectrometria de massa, é um epítopo
conformacional da citoqueratina-10 (CK10).
Nosso anticorpo específico de um epítopo de CK10 é o primeiro grande
biomarcador bi-funcional tecido específico para o diagnóstico e classificação
histopatológica de BC, o qual também estar associado com agressividade de
BCs. Além disso, o anticorpo identifica um subgrupo de BCs triplo negativos com
bom prognóstico. Seu papel no BCs devem ser abordados em estudos futuros.