Dissertação
Avaliação de anticorpos monoclonais reativos aos antígenos P30, P22 e P97 de Toxoplasma gondii, em ensaio imunoenzimático reverso, utilizados na detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA para o sorodiagnóstico da Toxoplasmose Humana
Registro en:
CARVALHO, Fernando dos Reis de. Avaliação de anticorpos monoclonais reativos aos antígenos P30, P22 e P97 de Toxoplasma gondii, em ensaio imunoenzimático reverso, utilizados na detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA para o sorodiagnóstico da Toxoplasmose Humana. 2006. 100 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2006.
Autor
Carvalho, Fernando dos Reis de
Institución
Resumen
The diagnosis of toxoplasmosis can be achieved by detecting specific antibodies in
patient serum samples using serological methods, mainly the enzymatic ones. But these
tests give a lot of false-positive and false-negative results, mostly for IgM and IgA
antibodies, making the diagnosis of primary and congenital infections a challenging
situation. This way, the present study aimed to evaluate the diagnostic performance of
the monoclonal antibodies (mAbs) A3A4 (anti-p30), A4D12 (anti-p22) e 1B8 (anti-p97)
in a reverse ELISA (ELISA-mAb) to detect IgG, IgM and IgA antibodies anti-T. gondii
in human serum samples. It was analysed 175 serum samples from patients at different
stages of infection: recent (n=45), transitional phase (n=40) and chronic (n=55), and
negative subjects (n=35) defined by conventional T. gondii serology. The achieved
results were compared with those obtained by indirect ELISA using soluble T. gondii
antigen (ELISA-STAg). The mAb A3A4 recognizes a conformational epitope in the
p30 surface antigen of T. gondii tachyzoites, while A4D12 and 1B8 recognize linear
epitopes in the p22 surface and p97 cytoplasmatic antigens, respectively. In an
inhibition ELISA test, in which human sera with specific T. gondii IgG antibodies were
used to compete with the mAbs for binding to their specific antigens, it was
demonstrated that the mAb A3A4 rather than A4D12 and 1B8 showed a better
competition capability. The results achieved by reverse ELISA-IgG using the mAbs
A3A4 or A4D12 to detect IgG antibodies anti-p30 and anti-p22, respectively, were
highly correlated with those obtained by ELISA- STAg, whereas the ELISA-mAb using
A4D12 (anti-p22) for the detection of IgM and IgA isotypes showed the highest
correlation with ELISA-STAg for both isotypes. ELISA-mAb using 1B8 did not
showed significant associations with ELISA-STAg for all the immunoglobulin isotypes
researched. In conclusion, this is the first report analyzing the performance of a reverse
ELISA for the detection of IgG, IgM and IgA isotypes towards native p22, p30 and p97
molecules from STAg, using a panel of human sera from patients with recent and
chronic toxoplasmosis. Thus, reverse ELISA based on capture of native p22 and p30
antigens of STAg by mAbs constitutes an alternative approach that may be considered
as an additional tool for the serological diagnosis of toxoplasmosis, particularly in cases
of primary and congenital infections. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas O diagnóstico da toxoplasmose se baseia na detecção de anticorpos específicos em
amostras de soro de pacientes, por meio de técnicas sorológicas, particularmente as
imunoenzimáticas. As maiores dificuldades na interpretação destes testes referem-se aos
resultados falso-positivos e falso-negativos, principalmente com relação à detecção de
anticorpos IgM e IgA anti-Toxoplasma gondii, tornando difícil o estabelecimento do
diagnóstico da infecção primária e infecção congênita. O presente trabalho objetivou
avaliar a utilização de anticorpos monoclonais (mAbs) A3A4 (anti-p30), A4D12 (antip22)
e 1B8 (anti-p97) em um ensaio imunoenzimático (ELISA) reverso para a detecção
de anticorpos IgG, IgM e IgA contra os antígenos p30, p22 e p97 de T. gondii em soros
humanos. Foram analisadas 175 amostras de soros de pacientes com infecção recente
(n=45), na fase de transição (n=40) e com infecção crônica (n=55), bem como de
indivíduos soronegativos (n=35), definidos por testes sorológicos convencionais. Os
resultados obtidos por ELISA reverso usando mAbs (ELISA-mAb) foram comparados
aos do ELISA indireto clássico usando antígeno solúvel de T. gondii (ELISA-STAg). O
mAb A3A4 reconhece um epítopo conformacional no antígeno de superfície p30,
enquanto os mAbs A4D12 e 1B8 reconhecem epítopos lineares, respectivamente, no
antígeno de superfície p22 e no antígeno citoplasmático p97 de taquizoítas de T. gondii.
Em testes ELISA de inibição utilizando soros positivos para competir com os mAbs
pela ligação a seus respectivos antígenos, o mAb A3A4 apresentou maior capacidade de
competição que os mAbs A4D12 e 1B8. Os resultados dos ELISA-mAbs A3A4 e
A4D12 para a detecção de IgG anti-p30 e anti-p22, respectivamente, foram altamente
correlacionados com aqueles obtidos pelo ELISA-STAg. Em relação à detecção de IgM
e IgA, os resultados do ELISA-mAb A4D12 (anti-p22) foram mais correlacionados com
aqueles determinados pelo ELISA-STAg. ELISA-mAb 1B8 não mostrou associações
significativas com ELISA-STAg para todos os isotipos de anticorpos analisados. Em
conclusão, a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA específicos aos antígenos p30, p22
e p97 de T. gondii foi demonstrada, pela primeira vez, utilizando um ELISA reverso
com mAbs que capturam estes antígenos presentes no STAg. Desta forma, os ELISAmAbs
A3A4 e A4D12 para a captura dos antígenos p30 e p22 mostraram representar
métodos alternativos para a detecção de anticorpos específicos a T. gondii e podem ser
considerados como ferramentas adicionais para um diagnóstico mais seguro da
toxoplasmose, particularmente nos casos de infecção primária e congênita.