Dissertação
Efeito da peçonha de Bothrops moojeni sobre formas promastigotas de Leishmania spp
Registro en:
CASTILHOS, Patrícia de. Efeito da peçonha de Bothrops moojeni sobre formas promastigotas
de Leishmania spp. 2008. 72 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2008.
Autor
Castilhos, Patrícia de
Institución
Resumen
In order to develop alternative tools to subdue infectious diseases, several substances
have been tested toward treatment of parasitoses, such as Leishmaniasis. For this purpose, snake
venoms have been used as future drugs that disrupt the viability of protozoan. In this report, we
evaluated the effect of Bothrops moojeni venom and its fractions on viability, protein profile,
infectivity and nitric oxide production of Leishmania promastigotes in vitro . Bothrops moojeni
venom was fractionated into five protein fractions (E1 to E5) by ion exclusion chromatography
and used to treat on L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis promastigote forms. The
viability of Leishmania promastigotes was evaluated by MTT test and nitric oxide production
was detected in supernatants of Leishmania culture. It was observed that E5 fraction strongly
inhibited NO production in different concentrations in L. amazonensis, while in L. brasiliensis
the NO production was enhance in ever concentration. It was also observed that crude venom of
B. moojeni inhibited the viability of the both parasites in a dose dependent manner. However the
E5 fraction only inhibited the viability of L. amazonensis. Also a peptide of 64 kDa of L (L.)
amazonensis was apparently degraded in other two peptides with 56 and 51 kDa respectively.
Moreover, when Leishmania spp was treated with E5 fraction and amphotericin B was not
observed degradation of proteins. And after studies with the E5 fraction in DEAE (-) Sephacel, it
was realized the exclusion cromatography and was obtained six new fractions (E5G1 and E5G6)
and the cellular viability Leishmania (L.) amazonensis was sensitive to E5G1 (≥ 0.156 μg) and
E5G5 (≥ 0.313μg). Adicionaly, it was analyzed the effect of Bothrops moojeni venon and the E5
fraction in the lesion progression of BALB/c mice infected with L. amazonensis and during the
following period of lesion evolution (six weeks) it was verified that the thickness of the footpads of all infected animals with pre treated parasites did not increase in comparison to the non
infected contralateral footpad. Thus, we demonstrated that Bothrops moojeni venom inhibited
NO production, altered the protein profile and reduced the viability and infectivity of Leishmania
promastigotes in vitro . Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas O estudo do tratamento de doenças infecciosas vem desenvolvendo ferramentas
alternativas e muitas substâncias estão sendo testadas no tratamento de parasitoses, como
Leishmanioses. Com esta proposta, a peçonha de serpentes tem sido estudada como droga capaz
de alterar a viabilidade de parasitos. Neste trabalho, foi avaliado o efeito da peçonha de Bothrops
moojeni e suas Frações protéicas na viabilidade, na produção de NO, na infectividade e nas
proteínas de promastigotas de Leishmania in vitro . A peçonha de Bothrops moojeni foi
fracionada em cinco Frações (E1 a E5) por cromatografia de troca iônica e usadas no tratamento
de promastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis. A viabilidade foi analisada
utilizando-se o MTT como substrato e a produção de óxido nítrico foi determinada no
sobrenadante das culturas dos parasitos pelo método de Griess. Foi observado que a Fração E5
inibe fortemente a produção de NO em diferentes concentrações em L. amazonensis, enquanto
em L. braziliensis a produção de NO apresentou aumento. Também foi observado que a peçonha
inibe a viabilidade de ambos parasitos de forma dose-dependente, enquanto a Fração E5 inibe a
viabilidade de L. amazonensis. Além disso, os parasitos tratados com peçonha apresentaram a
proteína de 64 kDa de L (L.) amazonensis aparentemente degradada em duas outras proteínas de
56 e 51 kDa respectivamente. Quando Leishmania spp foi tratada com Fração E5 e com
anfotericina B não foi observado nenhuma alteração no perfil eletroforético dos parasitos. E após
os estudos com a Fração E5 obtida na cromatografia de troca iônica, a mesma foi eluída em
cromatografia de exclusão molecular e foram obtidos seis novos picos de Frações protéicas
(E5G1 a E5G6). Estes foram testados na viabilidade celular de Leishmania (L.) amazonensis e o
parasito somente foi sensível às subFrações E5G1 (≥ 0.156 μg) e E5G5 (≥ 0.313μg). Adicionalmente foram analisados o efeito da peçonha de Bothrops moojeni e da Fração E5 na
progressão da lesão de camundongos BALB/c infectados por L. amazonensis. Durante o período
de acompanhamento da evolução da lesão (6 semanas), verificou-se que a espessura das patas
dos animais infectados com parasitos tratados até este período, não aumentou em relação à pata
contralateral não infectada. Assim, demonstramos que peçonha de Bothrops moojeni e suas
Frações protéicas alteram o perfil protéico e reduzem a viabilidade celular e a produção de NO
por Leishmania, levando a diminuição da infectividade dos parasitos tratados, observados pela
ausência de lesão nas patas dos camundongos inoculados com parasitos tratados com as
respectivas drogas.