The cluster of differentiation antigen 14 (CD14) is a key molecule of the innate immunity. This pattern recognition receptor binds mainly to lipopolysaccharide (LPS), lipotechoic acid, arachidonic acid and thus induces the releases various cytokines as a defense mechanism. Several studies suggest that different regions of the amino-terminal portion of the molecule may be involved in the LPS binding; however, controversial results on the recognition sequence still persist. In this work, functional epitopes of the CD14 molecule were mapped through Phage Display by using a 7-mer conformational constrained random peptide library against a monoclonal antibody anti-soluble CD14-fraction ST and a polyclonal anti-CD14. In silico and empirical analyzes were performed to map the selected peptides into the CD14 3D structure. Immunoreactivity tests of peptides against bacterial components of Gram+ and Gram- bacteria were performed in order to demonstrate their functional recognition. All peptides strongly reacted against all bacteria, and besides the recongtion of the amino-terminal region, we were able to demonstrate a second epitope site in the middle of the receptor. Additional in silico analysis suggests a possible role of CD14 epitopes as natural antimicrobial peptides.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoMestre em Genética e BioquímicaO antígeno de diferenciação 14 é uma molécula chave da imunidade inata. É um receptor de reconhecimento padrão que reconhece principalmente lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico e ácido araquidônico, após este reconhecimento a indução da liberação de diversas citocinas como um mecanismo de defesa do sistema imunológico. Diversos estudos sugerem diferentes epítopos da região N-Terminal da molécula como sítios de reconhecimento ao LPS, no entanto, resultados contraditórios sobre a sequência de reconhecimento ainda persistem. Neste trabalho, epítopos funcionais da molécula CD14 foram mapeadas através da técnica de Phage Display utilizando anticorpos anti-CD14 comerciais e uma biblioteca de peptídeos Ph.D-C7C expressa na superfície de fagos filamentosos M13. Análises in silico e funcionais foram realizadas para mapear os peptídeos selecionados na estrutura 3D do CD14 e verificar a imunoreatividade dos peptídeos contra componentes bacterianos (bactéria gram-positivas e gram-negativas). Os peptídeos selecionados reagiram fortemente contra diferentes bactérias, além do o reconhecimento da região amino terminal do CD14, foi demonstrado uma segunda região no meio do receptor com a capacidade de ligação a componentes bacterianos. Adicional análise in silico sugeriram um possível papel dos epítopos do CD14 como peptídeos antimicrobianos naturais.