Introduction: Hospital surfaces may be contaminated by Gram-negative bacteria, acting as a reservoir for these pathogens. Objectives: To determine the presence of Gram-negative bacteria isolated from the hospital surfaces of a Neonatal Intensive Care Unit by analyzing resistance profile, Extended Spectrum β-Lactamases (ESBL) and AmpC production, as well as check for infections and colonizations caused by these microorganisms. Methods: Environmental samples were collected with sterile swab moistened with 0.9% saline also sterilized. Gram-negative bacteria were identified by MALDI-TOF MS. Antimicrobial Susceptibility Testing was performed and all micro-organisms were screened for ESBL and AmpC production. Results: Of the 408 samples collected, 30 were positive for Gram-negative bacteria, 19 were Multidrug Resistant, 10 were ESBL and 19 AmpC producers. Daily surveillance included 148 neonates admitted to the NICU during the study period, 38 had infections isolating 56 samples obtained from different sites, 17 of them producing ESBL and 25 of AmpC. Conclusion: Gram-negative bacteria were found to contaminate the environment, including multidrug resistant ESBL and AmpC-producing samples, posing a risk to NICU neonates.Dissertação (Mestrado)Introdução: Superfícies hospitalares podem estar contaminadas por bactérias Gram-negativas, atuando como reservatório destes patógenos. Objetivos: Determinar a presença de bactérias Gram-negativas isoladas das superfícies hospitalares de uma Unidade de Terapia Intensiva Neonatal, analisando o perfil de resistência, a produção de β-Lactamases de Espectro Estendido (ESBL) e AmpC, bem como verificar infecções e colonizações causadas por esses micro-organismos. Métodos: As amostras do ambiente foram coletadas com swab esterilizado umedecido em salina a 0,9% também esterilizada. Bactérias Gram-negativas foram identificadas por MALDI-TOF MS. O Teste de Suscetibilidade aos Antimicrobianos foi realizado e todos os micro-organismos foram rastreados quanto à produção de ESBL e AmpC. Resultados: Das 408 amostras coletadas, 30 foram positivas para bactérias Gram-negativas sendo 19 multidroga resistentes, 10 eram produtoras de ESBL e 19 de AmpC. A vigilância diária incluiu 148 neonatos internados na UTIN no período de estudo, 38 apresentaram infecção isolando 56 amostras obtidas de diferentes sítios, sendo 17 produtores de ESBL e 25 de AmpC. Conclusão: Bactérias Gram-negativas foram encontradas contaminando o ambiente, incluindo amostras multidroga resistentes produtoras de ESBL e AmpC, representando um risco para os neonatos da UTIN.