Tese
Aspectos bioquímicos e morfológicos da matriz extracelular das cartilagens septal e alares do nariz suíno
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Autor
MESSIAS JÚNIOR, Nazário de Souza
Institución
Resumen
The objective of the present study was to characterize some aspects of the
extracellular matrix components of the alar and septal cartilage of the nose of swine and to
examine the histological and histochemical aspects of the two types of cartilage. The
kaotropic agent Gu-HCl was used to extract the matrix components. The predominant
glycosaminoglycan in the two caitilages was chondroitin sulfate. After ultracentrifugation,
the D4 fraction of the septal and alar cartilages was fractioned on DEAE-Sephacel using na
NaCl gradient. SDS-PAGE analysiys showed similarities between the two cartilages, with
the presence of fíbromodulin, decorin and binding proteins. Only the septal cartilage
presented the 115 kDa component, which possibly appears as 30 kDa subunits after the
action of the reducing agent. The glycosaminoglycan populations were determined by
fractionation on Sepharose CL-6B followed by analysis of the samples on the agarosepolyacrilamide
gel. The two cartilages presented a strongly polydispersed population,
which was less uniformly polydispersed in the septal than in the alar cartilage. AD2
fractionation on DEAE-Sephacel and sample analysis by SDS-PAGE and agarosepolyacrylamide
electrophoresis showed the presence of the small proteoglycans biglycan
and decorin, possible associated with the large proteoglycans.
The septal cartilage presents chondrocytes roughly arranged in rows accompanyng
the widest axis of the cartilage, whereas the alar cartilage presents chondrocytes
characteristically arranged in isogenic groups. Histhochemistry was performed usisng
Xylidine Ponceau for total proteins, Picrosirius-Hematoxylin for collagen, Toluidine Blue
for total glycosaminoglycans. And alcian blues, pH 2.5 and pH 1.0, for sulfated and
carboxylated glycosaminoglycans. Total glycosaminoglycans are more cleary visible in the
territorial matrix, whereas total proteins are more cleary visible in the interterritorial matrix.
The collagen of the septal cartilage is roughly organized along the longitudinal axis of the
specimens between the chondrocytes rows. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Este trabalho teve por objetivo caracterizar alguns aspectos dos componentes da
matriz extracelular de duas cartilagens do nariz suíno, as alares e a septal, além disso
caracterizar a organização histológica e alguns aspectos histoquimicos. Para extração de
componentes da matriz foi utilizado o agente caotrópico Gu-HCL O glicosaminoglicano
predominante para as duas cartilagens é o condroitim sulfato. Após ultracentriíugação dos
extratos a fração D4 das duas cartilagens foi fracionada em DEAE-Sephacel usando
gradiente de NaCl. A análise em SDS-PAGE, para as duas cartilagens mostrou
semelhanças com a presença de fibromodulim, decorim e proteínas de ligação. Somente a
cartilagem septal apresentou o componente de 115 kDa que possivelmente aparece como
subunidadesde30kDaapósaaçãodeagenteredutor. Para a determinação das
populações de glicosaminoglicanos foi utilizado fracionamento com Sephadex G-75,
seguida de análise em PAGE-Barbital. As duas cartilagens apresentaram uma população
fortemente polidispersa. As populações de proteoglicanos foram analisadas após
fracionamento em Sepharose CL-6B seguida de análise das amostras em gel agarosepoliacrilamida.
As duas cartilagens apresentam uma população fortemente polidispersa,
sendo que a septal é menos uniformemente polidispersa que a alar. O fracionamento de
AD2 em DEAE-Sephacel, e a análise em SDS-PAGE e agarose-poliacrilamida, mostraram
a presença dos pequenos proteoglicanos biglicam e decorim provavelmente associados aos
grandes proteoglicanos.
A cartilagem septal apresenta os condrócitos grosseiramente enfileirados
acompanhando o eixo maior da cartilagem, enquanto em alar os condrocitos estão dispostos
caracteristicamente em grupos isógenos. Para a histoquímica utilizou-se Xylidine
Ponceau para proteínas totais, Picrosirius-Hematoxilina para colágeno. Azul de Toluidina
para glicosaminoglicanos totais e Azul de Alcian em pH 2,5 e 1,0 para glicosaminoglicanos
sulfatados e carboxilados. Os glicosaminoglicanos totais estão mais evidenciados na matriz
territorial ao passo que as proteínas totais são mais evidenciadas na matriz interterritorial. O
colágeno em cartilagem septal está grosseiramente organizado acompanhando o eixo
longitudinal da peça entre as fileiras de condrócitos.