Tese
Estudo comparativo do processo espermatogênico e duração do ciclo do epitélio seminífero através da técnica de imunohistoquímica com Bromodeoxiuridina de três diferentes espécies de roedores da subordem Hystricomorfa: cutia (Dasyprocta leporina), paca (Cuniculus paca) e capivara (Hydrochoerus hydrochaeris)
Comparative study of the spermatogenic process and duration of the cycle of the seminiferous epithelium by immunohistochemical technique with bromodeoxyuridine in three different species of rodents of the suborder Hystricomorfa: agouti (Dasyprocta leporina), paca (paca Cuniculus) and capybara (hydrochaeris)
Registro en:
CARRETTA JÚNIOR, Moacir. Comparative study of the spermatogenic process and duration of the cycle of the seminiferous epithelium by immunohistochemical technique with bromodeoxyuridine in three different species of rodents of the suborder Hystricomorfa: agouti (Dasyprocta leporina), paca (paca Cuniculus) and capybara (hydrochaeris). 2012. 146 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. de) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2012.
Autor
Carretta Júnior, Moacir
Institución
Resumen
Dentre os animais da ordem Rodentia, subordem Hystricomorfa, destacam-se a capivara (Hydrochoerus hydrochaeris), cutia (Dasyprocta leporina) e paca (Cuniculus
paca) por apresentarem grande porte e alto potencial para exploração comercial, visando a produção de carne de excelente qualidade no mercado internacional. Estas
três espécies atualmente se encontram em baixo risco de extinção, segundo a IUCN (2012), mas considerando-se a crescente destruição do habitat natural destas espécies,
assim como a pressão de caça predatória que estas estão sujeitas em natureza, pode vir a ocorrer futuramente uma queda nos valores populacionais em vida livre. Desta forma, o conhecimento da biologia reprodutiva destas espécies é de grande valia no desenvolvimento de técnicas de reprodução assistida, o que vem de encontro com o interesse das atividades comerciais assim como trabalhos visando a conservação de espécies. Para a realização deste trabalho foram selecionados cinco exemplares de machos adultos de capivaras, do plano de manejo de capivaras do campus da
Universidade Federal de Viçosa; pacas, sendo uma proveniente do Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal de Viçosa e outras quatro do criatório
comercial Fazenda um sonho a mais Carangola MG; e cutias, sendo os cinco animais provenientes da criação comercial Chácara Lourenço Carreta - Santa Teresa
ES. Todas as origens dos animais estavam e dia com a legislação do instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renováveis (IBAMA). Os animais foram contidos física e quimicamente para a aplicação intratesticular de imunomarcador (5- Bromodeoxiuridina) assim como para os procedimentos de hemicastração. Todos os procedimentos nos animais foram aprovados previamente pelo Comitê de Ética para o uso de animais da Universidade Federal de Viçosa. Após hemicastração, os testículos coletados foram fixados em solução de Karnovsky e fragmentos distintos foram submetidos a processamento histológico em resina de glicol metacrilato, para análise morfológica e morfométrica do testículo, e em parafina, sendo estes montados em lâminas eletricamente carregadas, para à detecção por anticorpo monoclonal e reveladas pelo sistema de coloração streptavidin-biotin, através do kit de coloração BrdU.
Observou-se que a proporção de massa corporal alocada em testículos (índice gonadossomático) foi de 0,11% em capivaras, 0,27% em cutias e 0,28% em pacas. A
proporção do testículo alocado em mediastino e albugínea testiculares foram de aproximadamente 12% em capivaras, 8% em cutias e 6% em pacas, estando o valor para
estas duas últimas inferiores a maioria dos mamíferos já estudados. A proporção volumétrica de túbulos seminíferos apresentou altos valores em cutias (93%) e pacas
(91%), enquanto a capivara apresentou um dos menores valores já estudados (50%). O comprimento total de túbulos seminíferos por grama de testículo em capivaras (12,46m/g) está dentro do intervalo descrito para mamíferos, enquanto a paca e cutia apresentaram valores muito acima deste intervalo (26,7 e 35,5 m/g respectivamente). O
índice Tubulossomático (ITS) foi de 0,06% em capivaras, 0,23% em cutias e 0,24 em pacas, sendo que estes valores corroboram o comportamento de acasalamento descrito
para estas espécies. Foi observado que as três espécies apresentam o padrão tipo I de organização dos componentes do espaço intertubular proposto por Fawcett (1973),
estando a paca e cutia dentro do mesmo subpadrão descrito por Paula (1999) para a superfamília Cavioidea, enquanto a capivara encontra-se em subpadrão exclusivo. Os
valores de proporção volumétrica da célula de Leydig em cutias (2%) e pacas (2,6%) encontram-se próximo ao descrito para vários outros roedores enquanto a capivara
destaca-se por um valor extremamente mais alto (35%). Os índices leydigossomáticos (ILS) da cutia (0,005%) e paca (0,007%) encontram-se abaixo dos demais roedores já
estudados, enquanto a capivara apresenta valores similares a estes. A população de células de Leydig por grama de testículo em capivaras foi a maior encontrada (126
milhões de células/g) enquanto os valores de cutias (16 milhões) e pacas (35 milhões) estão bem abaixo. A população celular das diferentes células germinativas de capivaras,
cutias e pacas, em secções transversais do túbulo seminífero no estádio 1 do CES, se apresentaram dentro do intervalo observado na superfamília Cavioidea. As capacidades de suporte do total de células germinativas pelas células de Sertoli na cutia (22 células germinativas : 1 célula de Sertoli) e paca (24 células germinativas : 1 célula de Sertoli)
são superiores aos valores de outros roedores e principalmente das diversas espécies de
mamíferos domésticos já estudados, indicando uma grande eficiência destas células nessa espécie. A capivara (11 células germinativas : 1 célula de Sertoli) apresentou valores semelhantes aos demais roedores estudados. O processo de mitoses espermatogoniais apresenta uma perda de 93,23% em capivaras, 87,51% em cutias e 86,7% em pacas, caso estas possuam seis gerações de espermatogônias.O rendimento
meiótico e o rendimento geral da espermatogênese demonstraram uma perda do valor total teoricamente esperado respectivamente de 47,25% 92,5% em capivaras, 30% e 91,2% em cutias e 38,5 % e 93 %, estando dentro da amplitude observada para os demais mamíferos estudados. A duração do CES observada em capivaras (10,39 dias) e pacas (8,57 dias) encontra-se dentro do intervalo observado para as diversas espécies de roedores já estudados, enquanto a cutia apresentou a menor duração já relatada para um
roedor (5,86 dias). A reserva espermática por grama de testículo é de 105 milhões de espermatozoides em capivaras, 290 milhões em pacas e 674 milhões em cutias.O valor
da produção espermática por grama de testículo em cutias (115 milhões) foi extremamente superior à diversas espécies de mamíferos domésticos e selvagens já estudados, inclusive ao valor observado em pacas (34 milhões) e capivaras (10
milhões). Among the animals of the order Rodentia, suborder Hystricomorfa, we can
highlight the capybara (Hydrochoerus hydrochaeris, the agouti (Dasyprocta leporina)
and paca (Cuniculus paca) because of their big corporal dimensions and high potential
for commercial exploitation in order to produce excellent quality meat in the
international market. These three species are currently at low risk of extinction,
according to IUCN (2012), but considering the increasing destruction of natural habitat
of these species, as well as poaching pressure they are subjected in nature, may occur a
future decline in values in the wild population. Thus, knowledge of their reproductive
biology is extremely useful in the development of assisted reproduction techniques,
which is a great interest of business as well as works to promote the conservation of
species. For this work we selected five specimens of adult male capybaras, from the
management plan of capybaras in the campus of Universidade Federal de Viçosa; five
pacas, one from the Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal
de Viçosa and the other four commercial breeding "Um sonho a mais" - Carangola -
MG, and five agoutis, from commercial breeding "Chácara Lourenço Carreta" - Santa
Teresa - ES. All sources of animals were following the law of the Brazilian Institute of
Environment and Natural Resources (IBAMA). The animals were restrained physically
and chemically for the application of intratesticular immunomarker (5-
bromodeoxyuridine) as well as procedures of hemicastration. All procedures in animals
were previously approved by the Ethics Committee for animal use at the Universidade
Federal de Viçosa. After hemicastration, the testes collected were fixed in Karnovsky
solution and distinct fragments were subjected to histological processing in glycol
methacrylate resin, for histological and morphometric parameters of the testis, and
paraffin wax, which are mounted on slides electrically charged for the detection by
monoclonal antibody and revealed by staining system biotin-streptavidin, by BrdU staining kit. It was observed that the proportion of body mass allocated in testis (GSI)
was 0.11% in capybara, 0.27% and 0.28% in agouti in pacas. The proportion allocated
to the mediastinum testis and testicular albuginea was approximately 12% in capybaras,
agoutis 8% and 6% in pacas, and the value for the latter two are below the majority
mammals already studied. pacas, and the value for the latter two are below the majority
mammals already studied. The volumetric proportion of seminiferous tubules showed
high values in agouti (93%) and pacas (91%), while the capybara showed one of the
lowest values previously studied (50%) The total length of the seminiferous tubules of
testes per gram of testis in capybaras (12.46 m / g) is within the range described to
mammals, while the agouti and agouti showed values much above this range 26.7 and (35.5 m / g respectively) Tubulossomatic Index (TSI) was 0,06% in capybaras, agoutis,
and 0.23% in 0.24 in pacas, and these values confirm the mating behavior described for
these species. It was observed that the three species exhibit the pattern I organization of
the components of the intertubular space proposed by Fawcett (1973 ), with the agouti
and agouti within the same sub-pattern described by Paula (1999 ) for Cavioidea
superfamily, the capybara showed na unique sub-pattern. The values of volumetric
proportion of Leydig cell in agouti (2%) and pacas (2.6%) are close to that described for
various other rodents, while capybara distinguished by an extremely higher value
(35%). The Leydigossomatic index (LSI) of the agouti (0.005%) and paca (0.007%) are
below the other rodents already studied, while the capybara has values similar to these.
The population of Leydig cells per gram of testis in capybaras was found the largest
( 126 million cells / g) while the values of agouti (16 million) and pacas (35 million) are
below. The cell population of the different germ cells of capybaras, agoutis and pacas,
in cross sections of seminiferous tubule in stage 1 of the seminiferum epithelium cycle
(ESC), were within the range observed in the superfamily Cavioidea. The support
capabilities of all germ cells by Sertoli cells on the agouti (22 germ cells: one Sertoli
cell) and the agouti (24 germ cells: one Sertoli cell) are higher than other rodents and
mostly of the various species of domestic mammals already studied, indicating a high efficiency of these cells in this species. The capybara (11 germ cell: one Sertoli cell) had
values similar to other rodents already studieds. The process of spermatogonial mitoses
show a loss of 93.23% in capybaras, 87,51% in agoutis and 86.7% in pacas, if they have
six generations of meiotic spermatogonia. The meiotic yield and overall yield of
spermatogenesis showed a total loss of the theoretically expected value respectively
from 92.5% and 47.25% in capybaras, 30% and 91.2% in agoutis and 38.5% and 93%
in pacas, being within the range observed for the other mammals. An ESC observed in capybaras (10.39 days) and pacas (8.57 days) is in the range observed for several rodent
species already studied, while the agouti had the shortest duration ever reported for a
rodent (5.86 days). The sperm reserves per gram of testis is 105 million sperm in
capybaras, 290 million in pacas and 674 million in the agouti. The sperm production per
gram of testis in agoutis (115 million) was far superior to many species of wild and
domestic mammals already studied, including the value observed in pacas (34 million)
and capybaras (10 million). Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais