To mimic the two-signal requirements for T cell activation mediated by ligands, we exposed the superantigens SEA or SEE (signal 1) to T cells incubated with HLA-DR/LFA-3 or HLA-DR/137-1-CHO transfected cells (signal 2). LFA-3 costimulation was able to induce T cell proliferation as well as IFN-gamma and IL-4 production at similar levels as in cells induced by B7-1. Analysis of the CD28RE of the IL-2 promoter showed specific transcription factor recruitment at the CD28RE element upon induction by B7-1/SEE. Further functional Studies with an IL-2 enhancer-promoter carrying either wild type or mutated versions of the CD28RE site revealed that this element is necessary for full activation upon B7-1 costimulation. While both CD28/B7-1 and CD2/LFA-3 costimulation resulted in the up-regulation of IL-4 and IFN-gamma promoters, IL-2 promoter activity and production of IL-2 were only seen after B7-1 costimulation. However, contrary to what has been previously proposed, we show that costimulation with either B7-1 or LFA-3 further enhanced the ERK-2 activity and strongly activated the p38 MAPK pathway, but only B7-1 costiniulation induced high levels of JNK-1 activity. These data Suggest that the differential effect of CD28 vs. CD2 can be related to the difference in the ability of the two pathways to induce JNK-1 activity.Para imitar los requisitos de dos señales para la activación de células T mediada por ligandos, expusimos los superantígenos SEA o SEE (señal 1) a células T incubadas con células transfectadas con HLA-DR/LFA-3 o HLA-DR/137-1-CHO (señal 2). La coestimulación con LFA-3 fue capaz de inducir la proliferación de células T así como la producción de IFN-gamma e IL-4 a niveles similares a los de las células inducidas por B7-1. El análisis del CD28RE del promotor de IL-2 mostró el reclutamiento del factor de transcripción específico en el elemento CD28RE tras la inducción por B7-1/SEE. Estudios funcionales adicionales con un potenciador-promotor de IL-2 que lleva versiones de tipo salvaje o mutadas del sitio CD28RE revelaron que este elemento es necesario para la activación completa tras la coestimulación de B7-1. Si bien la coestimulación de CD28/B7-1 y CD2/LFA-3 dio como resultado la regulación positiva de los promotores de IL-4 e IFN-gamma, la actividad del promotor de IL-2 y la producción de IL-2 solo se observaron después de la coestimulación con B7-1. Sin embargo, contrariamente a lo que se ha propuesto anteriormente, mostramos que la coestimulación con B7-1 o LFA-3 mejoró aún más la actividad de ERK-2 y activó fuertemente la vía p38 MAPK, pero solo la coestimulación de B7-1 indujo altos niveles de JNK- 1 actividad. Estos datos sugieren que el efecto diferencial de CD28 frente a CD2 puede estar relacionado con la diferencia en la capacidad de las dos vías para inducir la actividad de JNK-1.