Due to its relevant economic importance, both for the food and pharmaceutical sectors, the olive tree is being increasingly cultivated around the world. For this, obtaining quality seedlings with uniformity and varietal suitability emerges as a highly relevant factor at the implantation of olive orchards. Thus, the objective of this work was to develop in vitro establishment protocol from nodal segments of two olive cultivars under different concentrations of sodium hypochlorite and different concentrations of BAP. The experiment was conducted on completely randomized design, in a triple factorial scheme (2x3x3), two olive cultivars (Arbequina and Koroneiki), three BAP concentrations (0,00; 2,22 e 4,44 µM) and three concentrations of sodium hypochlorite (0,6; 0,8 and 1,0% active chlorine) for the decontamination of the explants. Each treatment had three replicates and the experimental unit consisted of fve test tubes with one explant each. Afer 28 days, it was possible to observe that the treatments tested did not promote in vitro establishment of Olea europaea cv. Arbequina. The concentration of 2,22 µM of BAP added to the WPM and the 1,0% concentration of sodium hypochlorite used in disinfestation of the explants, presented promising results in the in vitro establishment of Olea europaea cv. Koroneiki.Devido a relevante importância econômica, tanto para o setor alimentício quanto farmacêutico, a oliveira vem sendo cada vez mais cultivada em todo o mundo. Para isso, a obtenção de mudas de qualidade com uniformidade e idoneidade varietal surge como fator altamente relevante na implantação dos pomares de oliveiras. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver protocolo de estabelecimento in vitro a partir de segmentos nodais de duas cultivares de oliveira sob diferentes concentrações de hipoclorito de sódio e concentrações de BAP. O experimento foi conduzido no delineamento inteiramente casualisado, em esquema fatorial triplo (2x3x3), sendo duas cultivares de oliveira (Arbequina e Koroneiki), três concentrações de BAP (0,00; 2,22 e 4,44 µM) e três concentrações de hipoclorito de sódio (0,6; 0,8 e 1,0% de cloro ativo) para a descontaminação dos explantes. Cada tratamento contou com três repetições e a unidade experimental constituída por cinco tubos de ensaio com um explante cada. Após 28 dias, foi possível observar que os tratamentos testados não foram eficientes no estabelecimento in vitro de Olea europaea cv. Arbequina. A concentração de 2,22 µM de BAP adicionada ao meio WPM e a concentração de 1,0% de hipoclorito de sódio, utilizada na desinfestação dos explantes, são ideais para o estabelecimento in vitro de Olea europaea cv. Koroneiki.