Trabalho de conclusão de graduação
Caracterização de lipases de mamona (Ricinus communis) expressas em Pichia pastoris
Autor
Massaglia, Luca
Campos, Gabriel Mendes
Institución
Resumen
Previamente, o nosso grupo de pesquisa clonou em Pichia pastoris duas
lipases presentes na membrana de corpúsculos lipídicos da semente de Ricinus
communis, denominadas RcOBL1 e RcATGL, gerando uma biblioteca de 20
recombinantes com 10 para cada lipase. Nesse contexto, o presente trabalho se
inseriu na produção e caracterização dos extratos brutos dos sobrenadantes dos
cultivos dos recombinantes contendo as lipases de interesse. A partir da
biblioteca gerada, duas cepas foram selecionadas, uma para cada lipase, em
que os meios de cultura, devido a expressão extracelular, apresentaram maior
atividade hidrolítica no éster 4-metilumbeliferil heptanoato (MUF-7), alcançando
valores de atividade de 148,0 U/L e 132,8 U/L para RcOBL1 e RcATGL,
respectivamente, em cultivo em frascos agitados. Dois métodos de concentração
do meio de cultura, liofilização e salting out, foram viáveis para as amostras
contendo as lipases estudadas, acarretando um aumento de atividade entre 111
e 198,5%. Através da caracterização, foi determinado que ambas as lipases
apresentaram melhor atividade em temperaturas acima de 50 °C e pH em torno
de 5, além de uma preferência por substratos de cadeia média e uma boa
estabilidade ao congelamento. O extrato bruto concentrado, no entanto, não foi
capaz de hidrolisar tributirina e óleos vegetais, o que pode ser explicado pela
baixa produção das lipases de interesse, conforme observado em eletroforese
em gel de poliacrilamida.