| dc.contributor | Castilho, Leda dos Reis | |
| dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/3155500836396709 | |
| dc.contributor | Ferraz, Helen Conceição | |
| dc.contributor | Alves, Tito Lívio Moitinho | |
| dc.contributor | Coelho, Maria Alice Zarur | |
| dc.creator | Zamprognio, Maycou Soares | |
| dc.date | 2023-04-19T15:41:57Z | |
| dc.date | 2023-09-27T03:00:30Z | |
| dc.date | 2019-02 | |
| dc.date.accessioned | 2023-09-27T14:06:30Z | |
| dc.date.available | 2023-09-27T14:06:30Z | |
| dc.identifier | http://hdl.handle.net/11422/20257 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8919030 | |
| dc.description | This work assessed the separation of virus-like particles (VLPs) through ultrafiltration operation. The VLPs were constitutively expressed by HEK293 - 3F6 cell line (Human Embryonic Kidney cells) transfected with commercial plasmidial vector PCINEO® (Promega) encoding the genetic sequences of premembrane (pr-M) and envelope (E) structural proteins of Zika virus. The assessment techniques were based on qualitative analysis, such as the Immunoblot test, SDS-PAGE and Western blot; protein quantification, through densitometry and Bradford assays; and the particle diameter distribution analysis by using HPLC/SEC-UV. Sequential batches of 14 mL in Vivaspin® devices embedded with polyethersulfone of 300 kDa and 1000 kDa membranes were analyzed and better performance was achieved with the lowest cut-off. Therefore, batch operations in agitated Amicon® cell filled with 200 mL of clarified supernant were conducted with 500 kDa polyethersulfone and 100 kDa regenerated cellulose membranes. Despite both membranes showing concentration capacity to Zika virus-like particles, the PES membrane displayed higher efficiency. | |
| dc.description | Este trabalho investigou a separação de partículas pseudovirais (VLPs) de Zika vírus contidas em sobrenadante de cultivo celular através da operação de ultrafiltração. As VLPs foram produzidas por células da linhagem HEK293 - 3F6 (Human Embryonic Kidney cells) transfectadas com o vetor plasmidial comercial PCI-NEO® (Promega) contendo as sequências genéticas referentes às proteínas estruturais de pré-membrana (pr-M) e envelope (E) do vírus Zika. As técnicas utilizadas neste estudo compreenderam análises qualitativas, a partir dos métodos de Immunoblot, SDS-PAGE e Western blot; quantificação de proteínas, através de testes de densitometria e Bradford; bem como análise da distribuição de tamanho de partículas, ao utilizar a metodologia de HPLC/SEC-UV. Operações em bateladas sequenciais de 14 mL em dispositivo Vivaspin® contendo membranas de poliétersulfona (PES) com massa molecular de corte de 300 kDa e 1000 kDa foram investigadas e a membrana de menor cut-off apresentou maior eficiência de separação. Desta forma, os estudos posteriores em célula de ultrafiltração agitada Amicon® avaliou o emprego das membranas de PES de 500 kDa e celulose regenerada (RC) de 100 kDa, no qual a membrana de PES de 500 kDa apresentou qualitativamente melhor desempenho na retenção e concentração das VLPs. | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal do Rio de Janeiro | |
| dc.publisher | Brasil | |
| dc.publisher | Instituto Alberto Luiz Coimbra de Pós-Graduação e Pesquisa de Engenharia | |
| dc.publisher | Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química | |
| dc.publisher | UFRJ | |
| dc.rights | Acesso Aberto | |
| dc.subject | Flavivírus | |
| dc.subject | Zika | |
| dc.subject | Partícula pseudoviral | |
| dc.subject | Concentração | |
| dc.subject | CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA::PROCESSOS INDUSTRIAIS DE ENGENHARIA QUIMICA::PROCESSOS BIOQUIMICOS | |
| dc.title | Concentração de partículas pseudovirais de Zika vírus por ultrafiltração | |
| dc.type | Dissertação | |
