TCC
Avaliação da técnica de dosagem de ATP por bioluminescência para a determinação da viabilidade do BCG em amostras de vacina liofilizada
Registro en:
FRANÇA, Dener Oliveira Lima e. Avaliação da técnica de dosagem de ATP por bioluminescência para a determinação da viabilidade do BCG em amostras de vacina liofilizada. 2022. 52f. Trabalho de Conclusão de Curso, (Especialização)-Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2022.
Autor
França, Dener Oliveira Lima e
Resumen
A tuberculose é causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis e figura como a principal doença bacteriana transmissível. Aproximadamente dois bilhões de pessoas, no mundo, estão infectadas com tuberculose latente não apresentando sintomas. Estima-se que anualmente 10 milhões de pessoas desenvolvam tuberculose ativa e 1,5 milhões evoluam para óbito. As medidas preventivas incluem o rastreamento de grupos de risco, detecção e tratamento dos casos e imunização com vacina bacilo Calmette-Guérin (BCG). A vacina BCG é preparada com cepas atenuadas de Mycobacterium bovis e submetida a testes de controle da qualidade que incluem a determinação da viabilidade dos bacilos mediante contagem de unidades formadoras de colônias (UFC). Para tal, é necessária incubação de cerca de quatro semanas para que seja possível observar o crescimento das colônias bacterianas. Por isso, torna-se imperativa a utilização de métodos alternativos, como o ensaio de dosagem de ATP, para tornar o processo mais rápido. Assim, propôs-se um estudo para avaliar se o método de dosagem de ATP por bioluminescência pode ser utilizado para estimar a viabilidade do BCG em amostras de vacina liofilizada. A concentração de ATP foi determinada por medição da bioluminescência na presença de luciferina/luciferase. Inicialmente, definiu-se detalhes importantes para modificação do protocolo da Organização Mundial da Saúde, tais como o uso de tampão Tris-EDTA (TE) para extração do ATP e o volume de solução de reação adequado para os ensaios. Em seguida avaliou-se a linearidade, os limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ), e a precisão do método. Por fim, correlacionou-se a dosagem de ATP com a técnica de contagem de UFC. Demonstrou-se que a extração de ATP da vacina BCG utilizando tampão TE aquecido apresentou rendimento superior em relação a utilização, apenas, da solução de detecção do kit. Além disso, observou-se que não houve diferença estatisticamente significativa entre a quantidade de ATP detectada utilizando diferentes volumes da solução de detecção. O método de dosagem de ATP da vacina BCG apresentou boa correlação linear para o padrão de ATP (R2 = 0,999), para amostras de vacina BCG (viabilidade) (R2 = 0,999), e para os materiais de referência BRA/BCG/003 (R2 = 0,992), Moreau-RJ (R2 = 0,991), Tokyo (R 2 = 0,984) e Russian BCG-I (R 2 = 0,953). O LD e LQ encontrados foram de 0,014 ng/ml e 0,080 ng/ml, respectivamente. O método de dosagem de ATP em vacina BCG liofilizada apresentou boa repetibilidade com coeficiente de variação <19% para amostras de viabilidade e <12% para amostras de termoestabilidade, e boa precisão intermediária com coeficiente de variação de 16,2% para amostras de viabilidade e 25,9% para a referência BRA/BCG/003. O método também apresentou boa correlação com a contagem de UFC. Conclui-se que o método de dosagem de ATP em vacina BCG liofilizada obtém resultados com linearidade e precisão para estimar a viabilidade do BCG. Além disso, os resultados obtidos com o método apresentam boa correlação com os resultados obtidos com o método tradicional recomendado pela farmacopeia brasileira. Portanto, sugere-se que o método pode ser adequado para fins de controle da qualidade de vacinas BCG liofilizadas