Dissertation
Desenvolvimento de sistemas baseados em amplificação isotérmica em alça (LAMP) para o diagnóstico da doença de Chagas
Registro en:
LACERDA, Sarah de Souza. Desenvolvimento de sistemas baseados em amplificação isotérmica em alça (LAMP) para o diagnóstico da doença de Chagas. 2021. 84 p. Dissertação, (mestrado)-Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2021.
Autor
Lacerda, Sarah de Souza
Resumen
A doença de Chagas representa um importante problema de saúde pública, principalmente na América Latina. O diagnóstico precoce durante a fase aguda é crucial, pois permite o tratamento imediato, podendo interferir no prognóstico. A técnica de amplificação isotérmica em alça (LAMP) vem demonstrando potencial, por ser sensível, específica, de fácil execução e baixo custo. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver sistemas baseados em LAMP para o diagnóstico da doença de Chagas. Inicialmente foram avaliados dois sistemas descritos na literatura: Thekisoe et al. e Ordóñez et al. O sistema de Ordóñez et al. demonstrou elevada sensibilidade e especificidade, sendo utilizado como sistema de LAMP convencional e para o desenvolvimento de um sistema de LAMP em tempo real. O sistema de LAMP convencional foi aplicado em amostras de 77 indivíduos expostos ao surto agudo ocorrido em Ibimirim/PE e comparado ao diagnóstico parasitológico, sorológico e ao sistema de qPCR (TcSAT-IAM). Segundo critérios da Secretaria Estadual de Saúde de Pernambuco, 28 casos foram confirmados pelo critério laboratorial e 10 pelo clínico-epidemiológico. Considerando o critério laboratorial, a sensibilidade e especificidade do sistema de LAMP foi de 39,29% e 83,67%, respectivamente. Considerando o diagnóstico pelo sistema TcSAT-IAM, o sistema de LAMP apresentou sensibilidade de 60,87%, especificidade de 90,74%, acurácia de 81,82% e concordância considerada moderada. A coleta das amostras após o início do tratamento e o tempo de armazenamento representaram importantes limitações do estudo. Estes resultados demonstram a importância da coleta e armazenamento adequados das amostras e sugerem um “padrão-ouro composto”, considerando os testes preconizados em conjunto com técnicas moleculares, sendo a técnica de LAMP mais acessível para áreas de recursos limitados. Para facilitar a implementação na rotina laboratorial, foi desenvolvido um kit baseado em LAMP para o diagnóstico da doença de Chagas aguda . Chagas disease represents an important public health problem, especially in Latin America. Early diagnosis during the acute phase is crucial, as it allows for immediate treatment and may interfere with the prognosis. The Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) has shown potential, as it is sensitive, specific, easy to perform and low cost. The objective of the present work was to develop LAMP-based systems for the diagnosis of Chagas disease. Initially, two systems described in the literature were evaluated: Thekisoe et al. and Ordóñez et al. The system by Ordóñez et al. showed high sensitivity and specificity, being used as a conventional LAMP system and for the development of a real-time LAMP system. The conventional LAMP system was applied to samples from 77 individuals exposed to the acute outbreak that occurred in Ibimirim/PE and compared to the parasitological and serological diagnosis and to the qPCR system (TcSAT-IAM). According to criteria of the Secretaria Estadual de Saúde de Pernambuco, 28 cases were confirmed by laboratory criteria and 10 by clinical-epidemiological criteria. Considering the laboratory criteria, the sensitivity and specificity of the LAMP system was 39.29% and 83.67%, respectively. Considering the diagnosis by the TcSAT-IAM system, the LAMP system had a sensitivity of 60.87%, specificity of 90.74%, accuracy of 81.82% and agreement considered moderate. The collection of samples after the beginning of the treatment and the storage time represented important limitations of the study. These results demonstrate the importance of proper collection and storage of samples and suggest a “compound gold standard”, considering the tests recommended in conjunction with molecular techniques, being the LAMP technique more accessible for areas with limited resources. To facilitate implementation in laboratory routine, a LAMP-based kit for the diagnosis of acute Chagas disease was developed .
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