Um método para a detecção de resíduos de organofosforados em leite bovino, que utiliza um kit baseado na inibição da enzima acetilcolinesterase, é apresentado. Para isso, uma nova técnica de extração de organofosforados em leite bovino, que também pode ser utilizado na quantificação de tais compostos por cromatografia gasosa, foi desenvolvida. Amostras de leite UHT orgânico foram fortificadas com0,005 a 0,1 μg/ mL de parationa-metílica e clorpirifós. O limite de detecção calculado para ambos os compostos foi de 0,005 μg/ mL. A metodologia provou ser adequada para a adoção em programas de monitoramento que visam o controle de qualidade do leite bovino.A method for detection of organophosphate residues in bovine milk, using a kit based on the inhibition of acetylcholinesterase, is presented. For this purpose, a new technique for extracting organophosphorus in bovine milk, which can also be used in the quantification of such compounds by gas chromatography, was developed. This extraction method can also be used in the quantification of such compounds by gas chromatography. Samples of UHT organic milk were fortified with 0,005 to 0.1 µg/mL of parathion-methyl and chlorpyrifos. The calculated detection limit for both coumpounds was 0,005 µg/mL. The methodology proved to be suitable for adoption in programs aiming the monitoring of bovine milk quality.