Nas últimas décadas, houve avanços no uso de linhagens celulares como modelos e ferramentas na pesquisa, em medicina e indústria, sendo amplamente utilizadas em pesquisa básica, descoberta e desenvolvimento de novos fármacos, vacinas, produtos biotecnológicos e ferramentas terapêuticas. Entretanto, um grande problema enfrentado atualmente é a falta de reprodutibilidade dos estudos in vitro, principalmente devido a problemas de contaminação ou de autenticação das linhagens celulares. Neste trabalho foi realizada uma análise, da legislação nacional brasileira e de normas internacionais acerca do estabelecimento e da caracterização de bancos de células, bem como questões relacionadas ao tema. Foi identificada uma lacuna regulatória nacional com relação ao tema e, por isso, documentos internacionais foram analisados para identificar os requisitos de estrutura, procedimentos e ações de gestão da qualidade. Foram identificados, ainda, parâmetros importantes para estabelecimento e manutenção de um banco de células em um laboratório de pesquisa. O modelo de banco de célula com dois níveis, o banco mestre e o banco de trabalho, demonstrou ser o mais eficiente, pois atende às recomendações vigentes e pode ser facilmente dimensionável para laboratórios e instituições de pesquisa. Em adição, as normas de boas práticas devem ser adotadas durante o armazenamento sob a estrutura de banco de células e a manipulação das linhagens, a fim de mitigar o risco de contaminação e erros de identificação. Neste contexto, para garantia das células do banco, são apontadas as seguintes atividades de maior importância para a observação das boas práticas de cultura de células: documentação, critérios para aquisição e incorporação de linhagens no banco, congelamento celular e, controle microbiológico e de identidade. A observação de boas práticas nestas atividades fortalece a estrutura do banco de células, assegurando a qualidade do material biológico armazenado. Ao descrever as atividades foi possível mapear dois importantes processos: Aquisição de linhagens celulares e estruturação do banco de células de dois estágios. Em suma, o presente trabalho identificou gargalos e atividades essenciais, na manutenção de um banco de células, bem como no o seu uso pelos laboratórios de pesquisa, a fim de melhorar ou estabelecer práticas adequadas de formação e manutenção dos mesmos, garantindo a confiabilidade e reprodutibilidade dos dados gerados a partir dos experimentos com linhagens celulares.In the last decades, we have observed advances in the use of cell lines as models and research tools in medicine and industry, being widely used in basic research, discovery and development of new drugs, vaccines, biotechnological products and new therapeutic strategies. Nowadays a major problem is faced: the lack of reproducibility of in vitro studies, mainly due to contamination or cell line misidentification. In this work, we have performed an electronic search of Brazilian legislation and international standards on the establishment and characterization of cell banks. In Brazil, we have found a regulatory gap in respect to the establishment and characterization of cell banks. In order to fill the gaps in Brazilian legislation, international documents were analyzed to identify the basic parameters and requirements of structure, quality and procedures for establishment and maintenance of a cell bank in a research laboratory. The model consisting of a two-tiered bank, a master cell bank and a working cell bank, meets current recommendations and can be easily customized for laboratories and research institutions. Concerning the procedures, in order to mitigate the risk of contamination and misidentification, storage under the cell bank structure and handling of lineages following good practice standards should be adopted. In this context, we have identified the following activities of crucial importance for the observation of good cell culture practices: documentation, criteria for acquisition and incorporation of lineages in the bank, cell freezing, microbiological and identity control. The observation of good practices in these activities strengthens the structure of the cell bank, ensuring the quality of stored biological material. After identification of activities and procedures in the cell bank, it was possible to draw two important processes: Acquisition of cell lines and structuration of the two-stage cell bank. The regulatory material collected, the forms shown in this study, the identification of bottlenecks and minimal core activities, empower and underpin the research laboratories to improve or establish appropriate practices for training and to maintain their cell banks. A cell bank, and ultimately a cell line with quality, will increase the reliability and reproducibility of data generated in the research projects.