Os autores estudaram o comportamento "in vitro" do Trypanosoma encontrado nas rãs brasileiras, visando critérios adicionais na caracterização específica deste grupo. Utilizaram diferentes meios de cultura (NNN, Novy e Mac Neal, SNB 9 de Diamond 1954, Boné & Steinert, 1956 Boné & Parent 1963 e Halevy & Gisry 1964) no isolamento do Trypanosoma rotatorium encontrado com certa freqüência na rã Leptodactylus com larga distribuição na região Neotropical. Observamso que o comportamento do T. rotatorium das rãs desta região em meios de cultura mostra características bem diferentes daquelas observadas com tripanosomas de outras regiões, quer seja pela dificuldade de manutenção em subcultura, quer pelas formas de divisão desenvolvidas. Empregamos os mesmos meios de cultura utilizados nos isolamentos dos tripanosomas de rã da Europa e como pode ser visto no Quadro I os resultados obtidos com material da região Neotropical são concordantes, surgerindo, pelo menos uma variação dentro da espécie.Different culture media were employed to isolate T. rotatorium, a common parasite in the blood of brazilian frog Leptodactylus ocellatus. Although we have isolated the parasite in three different media (SNB-9, Boné Parent and Boné Steinert media), subcultures were not obtained. Theses facts confirm the results also pointed out by Machado 1911 with T. rotatorium from hosts collected in the same region. In accordance with the factes observed in the litterature (see table I in this work) our results suggest an important difference between the T. rotatorium of neotropical region and that of the other regions, which are easily cultivated in subcultures. The culture forms present some differential aspects in T. rotatorium mainly by production of "Somatelas".