RESUMEN Introducción: La Brucelosis es una zoonosis común y en muchos países es un problema sanitario prevalente. En Paraguay no se ha encontrado evidencia de los conocimientos que tienen los trabajadores de hatos lecheros y las prácticas preventivas que utilizan. Objetivo: Evaluar el conocimiento, las prácticas de prevención y de bioseguridad sobre Brucelosis de los trabajadores expuestos a riesgo en hatos lecheros del departamento de Caaguazú, Paraguay. Materiales y métodos: Se realizó un estudio transversal, en una muestra representativa de establecimientos ganaderos del Departamento de Caaguazú. De mayo a junio de 2017 se entrevistó a 720 trabajadores de 360 hatos lecheros, utilizando un cuestionario estructurado, con preguntas cerradas. Se obtuvo información de los conocimientos, prácticas de prevención y bioseguridad sobre Brucelosis. Resultados: La mediana de edad de los trabajadores fue 34 años, 70% eran hombres. El 11,7% era analfabeto y 62,1% solo culminó la primaria. El 90% se desempeñaba como tambero/ordeñador. El 64% manifestó que no conocía la enfermedad, 73,6% ignoraba la forma en que se adquiere la enfermedad, 71,5% nunca recibió información acerca de la Brucelosis. El 73,3% no tenía conocimientos de las prácticas preventivas. Todos consumían subproductos lácteos sin pasteurizar, principalmente queso paraguay Conclusión: Existe desconocimiento de la enfermedad y la forma de transmisión. Las prácticas de riesgo son frecuentes. Es necesario implementar programas de educación y concienciación sobre la Brucelosis.