Egreso y aislamiento de Helicobacter pylori desde la vacuola de Candida albicans tras la exposición a antifúngicos.

Abstract

H. pylori es una bacteria patógena que infecta el epitelio gástrico de humanos. Posee una alta prevalencia en la población. Desencadena lesiones gástricas de distinta gravedad, desde gastritis superficial hasta cáncer gástrico. Presentando resistencia a diversos antibióticos, siendo clave para la eficacia de su tratamiento la claritromicina. Debido a esto, la OMS la incluyó en la categoría de prioridad 2 (elevada), en la lista de bacterias para las que necesitan urgentemente nuevos antibióticos. Es una bacteria de cultivo complejo y que se aisla desde el ser humano, la cual no se ha logrado recuperar o cultivar desde el medio ambiente. Las vías de transmisión no están del todo claras, lo que genera incertidumbre considerando su alta prevalencia en la población mundial, desde un 50%. Esto hace pensar que H. pylori pueda ocupar otro microorganismo como refugio transitorio para resistir el estrés ambiental. Se propone al género Candida, en particular a Candida albicans, levadura comensal que comparte varios nichos de colonización en el cuerpo humano junto a H. pylori. La vacuola de C. albicans ofrecería un sitio de refugio y nutrientes para H. pylori cuando ésta se encuentre bajo condiciones desfavorables. En este estudio expusimos cultivos de levaduras C. albicans con H. pylori al interior de su vacuola a distintos antifúngicos como fluconazol, clotrimazol y ketoconazol en concentraciones subletales de 0,5ug/ml y 1µg/ml para inducir el egreso de H. pylori debido al estrés generado. Luego se filtró a los microorganismos, se aisló H. pylori y cultivó en placas con agar columbia. Este fenómeno se analizó mediante microscopia óptica y de epifluorescencia, (FISH, PCR), por tinción de Gram y test de ureasa. La exposición por clotrimazol al 1µg/ml fue el mejor candidato para el egreso de H. pylori y la exposición por fluconazol al 1µg/ml mantuvo en mayor cantidad la interacción C. albicans-H. pylori. Con esto se buscó evidenciar el rol que presenta C. albicans como vehículo de propagación y recolonización de H. pylori, al demostrar el cultivo de H. pylori tras su egreso de la vacuola de C. albicans. Además, aportar información para contribuir a terapias efectivas en la erradicación de esta bacteria patógena de interés mundial.

H. pylori is a pathogenic bacterium that infects the gastric epithelium of humans. It has a high prevalence in the population. It triggers gastric lesions of varying severity, from superficial gastritis to gastric cancer. It presents resistance to several antibiotics, being clarithromycin the key to its treatment efficacy. Because of this, the WHO included it in priority category 2 (high), in the list of bacteria for which new antibiotics are urgently needed. It is a bacterium of complex culture and is isolated from humans, which has not been recovered or cultured from the environment. The routes of transmission are not entirely clear, which generates uncertainty considering its high prevalence of 50% in the world population. This suggests that H. pylori may occupy another microorganism as a transient refuge to resist environmental stress. The genus Candida is proposed, in particular Candida albicans, a commensal yeast that shares several colonization niches in the human body together with H. pylori. The vacuole of C. albicans would provide a site of refuge and nutrients for H. pylori when it is under unfavorable conditions. In this study, we exposed yeast cultures with H. pylori in their vacuole to different antifungals such as fluconazole, clotrimazole and ketoconazole at sub-lethal concentrations of 0.5ug/ml, which causes stimulation of H. pylori egress by stressing the yeast cells. The microorganisms are then filtered to isolate H. pylori and cultured. This phenomenon is analyzed by optical and epifluorescence microscopy, molecular FISH, PCR, Gram staining and urease test. The aim is to demonstrate the role of C. albicans as a vehicle for the propagation and recolonization of H. pylori, as well as to provide information to contribute to effective therapies for the eradication of this pathogenic bacterium of worldwide interest.