Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório, causador da toxoplasmose, que pode afetar tanto humanos, quanto um vasto número de espécies animais de sangue quente. Nos animais silvestres a infecção por T. gondii é bastante comum e vários estudos da literatura têm demonstrado sua ocorrência em diferentes organismos. Contudo, o conhecimento da história natural da maioria das zoonoses parasitárias na América do Sul ainda é pouco compreendido tanto nos humanos quanto nos animais. Particularmente, nos animais, a dificuldade na obtenção de amostras e o conhecimento insuficiente da biologia, ecologia e comportamento limitam estas pesquisas. Assim, o presente estudo objetivou isolar e caracterizar geneticamente (PCR-RFLP) o parasito T. gondii em amostras de tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla), um importante animal silvestre da nossa região. As amostras biológicas de sangue (e tecidos, apenas dos animais que vieram a óbito) de M. tridactyla foram coletadas no SACCAS/Hospital Veterinário “Dr. Halim Atique”, após terem sido vítimas de queimadas ou atropelamentos. As amostras foram analisadas no Laboratório de Imunogenética em parceria com o Laboratório de Virologia, ambos da FAMERP, e também com o Laboratório de Doenças Parasitárias, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da USP. O Teste de Aglutinação Modificada (MAT) foi realizado em 23 indivíduos da espécie para a tentativa de detecção de anticorpos anti-T. gondii em suas amostras sorológicas. Para a tentativa de isolamento do T. gondii, amostras teciduais de tamanduá-bandeira foram processadas (digestão péptica) e inoculadas em camundongos da linhagem Balb/c. Entre as 23 amostras sorológicas analisadas, foi constatada a presença de anticorpos anti-T. gondii em amostras de 13 indivíduos (56,52%). O isolamento do parasito foi realizado a partir de amostras teciduais de 1 indivíduo, entre 7 animais da espécie que vieram a óbito (14,28%), e esse camundongo também apresentou sorologia reagente para anticorpos anti-T. gondii. O isolamento de T. gondii é inédito neste animal e apresenta alta relevância clínica em humanos, uma vez que as linhagens infectantes são as mesmas nos animais silvestres e humanos e, nos primeiros, este processo é facilitado devido à alta concentração de parasitos nas amostras biológicas. Assim, é possível verificar a presença da infecção por T. gondii na espécie do tamanduá-bandeira e, pelo fato da espécie M. tridactyla (tamanduá-bandeira) apresentar um hábito forrageador, é relevante relatar a contaminação ambiental por T. gondii.Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that causes toxoplasmosis, which can affect both humans and a large number of warm-blooded animal species. In wild animals, T. gondii infection is quite common and many published studies have demonstrated its occurrence in different organisms. However, the knowledge of the natural history of most parasitic zoonoses in South America is poorly understood both in humans and animals. Particularly, in animals, the difficulty in obtaining samples and the insufficient knowledge of the biology, ecology and behavior limit these researches. Thus, this study aimed to isolate and characterize genetically (PCR-RFLP) the T. gondii parasite in giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) samples, an important wild animal is our region. Biological samples of M. tridactyla blood (and tissues, only from animals that died) were obtained in SACCAS/Veterinary Hospital “Dr. Halim Atique” after they have been victims of fires or roadkill. The samples were analyzed in Immunogenetics Laboratory in partnership with the Virology Laboratory, both of FAMERP, and also with the Parasitc Diseases Laboratory, Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science at USP. The Modified Agglutination Test (MAT) was carried out in 23 individuals of the species to attempt detection of anti-T. gondii in their serum samples. In an attempt to isolate T. gondii, tissue samples of giant anteater were processed (peptic digest) and inoculated into Balb/c lineages mice. Among the 23 serum samples analyzed, it was found the presence of antibodies to anti-T.gondii in samples of 13 individuals (56,52%). The isolation of the parasite was performed from tissues samples from 1 individual, among 7 animals of the species that died (14,28%), and this mouse also presented reagent sorology. The isolation of T. gondii is unprecedented in this animal and has high clinical relevance in humans as the infectings strains are the same in wild animals and humans and in the first, this process is facilitated due to the high concentration of parasites in biological samples. Thus, it’s possible to verify the presence of T. gondii infection in giant anteater species and, because of it’s foraging habit, its relevant reporting the environmental contamination by T. gondii.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)FAPESP: 2014/05302-8