Cheirodontinae constitutes a group of 17 genera and 55 species still poorly studied cytogenetically, being that most data available in the literature is for the Alto Paraná basin. In this study Odontostilbe pequira, Serrapinnus kriegi, Serrapinnus calliurus and Serrapinnus microdon from Alto Paraguay basin was characterized cytogenetically. The modal diploid number 2n=52 found for these species, as well as most of the data cited in the literature, is an evidence of a conservadorism in chromosome number for the group.Cheirodontinae constitui um grupo de 17 gêneros e 55 espécies ainda pouco estudadas citogeneticamente, sendo que a maioria dos dados disponíveis na literatura é da bacia do Alto Paraná. No presente estudo são caracterizadas cromossomicamente as espécies Odontostilbe pequira, Serrapinnus kriegi, Serrapinnus calliurus e Serrapinnus microdon da bacia do Alto Paraguai. O número diplóide modal 2n=52 encontrado para estas espécies, bem como a maioria dos dados citados na literatura, evidencia um conservadorismo do número cromossômico para o grupo.Fundo de Amparo à Pesquisa de Mato Grosso (FAPEMAT)Universidade do Estado de Mato Grosso (UNEMAT), campus de Tangará da Serra, MTInstituto Federal de Educação Ciência e Tecnologia (IFMT), campus de Campo Novo dos Parecis, MTUniversidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP), campus de Botucatu,SPUniversidade Federal do ABC (UFABC), campus de Santo André, SPUniversidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (UNESP), campus de Botucatu,SP