Efecto de Porphyromonas gingivalis sobre la viabilidad y regulación del ciclo celular en células endoteliales de microvasculatura de cerebro de ratón (MBMEC)

Abstract

Antecedentes: Recientemente se ha demostrado que la periodontitis en estadios avanzados puede jugar un papel potencial en la etiología y progresión de la enfermedad de Alzheimer. Se cree que su acción altera el microambiente de la BHE en el endotelio microvascular, produciendo cambios en el ciclo celular, citotoxicidad y alteraciones en las proteínas de unión, logrando acceder al cerebro y aumentando la expresión de citoquinas generadas por una respuesta inflamatoria que causa lesiones en el SNC. Objetivo: Evaluar el efecto de P. gingivalis ATCC 381 sobre la viabilidad y regulación del ciclo celular de MBMEC. Métodos: Se estandarizó el inóculo de P. gingivalis 381 en ensayos por triplicado para poder estimular las MBMEC a concentraciones de MOI 5, 10, 50, 100 y 200; como controles se utilizó células sin estimular, lisado celular de P. gingivalis y tritón-x; se evaluó la viabilidad celular por el método de resazurina y liberación de LDH a tiempos de 6, 12, 24, 48 y 72h, y se determinó los cambios de las fases del ciclo celular con la técnica 7-AAD a tiempos de 24 y 48h; los datos se analizaron por la prueba de ANOVA y se asumió una diferencia estadísticamente significativa de P<0.05. Resultados: Se estableció el inóculo de P. gingivalis 381 en un rango de DO=0.944-0.945 donde se obtuvieron recuentos reproducibles. Se observó que ante los diferentes estímulos, esta cepa redujo la viabilidad de MBMEC a las concentraciones más altas y conforme pasa el tiempo en más del 50% siendo significativo (P<0.05) comparado con el control (SE100%); por otro lado se evidenció también un aumento en la liberación de LDH a concentraciones mayores de MOI. También se encontró que este patógeno produce cambios en la distribución celular durante las fases del ciclo celular, encontrando arrestos en las fases S y G0/G1 dependientes del tiempo de exposición. Conclusiones: P. gingivalis es citotóxica a concentraciones altas de MOI y es capaz de inducir cambios en la distribución de las fases del ciclo celular, induciendo arrestos en G0/G1 a las 24h y en S a las 48h.