Determinación de la huella transcripcional de mastocitos aislados de pulpa dental humana sana y con rasgos clínicos de inflamación

Abstract

Propósito: Durante años se ha relacionado a los mastocitos con procesos alérgicos debido a su producción de histamina y su papel en el shock anafiláctico, sin embargo, en la actualidad se sabe que los mastocitos podrían realizar diferentes estrategias de degranulación según el microambiente en el que residan. En la pulpa dental humana (hDP) ha habido controversia sobre la presencia de esta célula, así como su función. El objetivo de este estudio fue determinar los perfiles de mastocitos de pulpa dental humana (hDPMC) en salud e inflamación. Métodos: Estudio de corte transversal con muestreo por conveniencia, en el que se obtuvieron 77 hDP de sujetos sanos (n=34) y pacientes con pulpitis irreversible (n=43), sin diferencias en la distribución por sexo ni edad. Del total de muestras obtenidas, para caracterizar e inmunolocalizar la hDPMC se evaluaron 31 hDP (67.4%) por técnica inmunohistoquímica (IHC), y 9 hDP (19.6%) por citometría de flujo (FACs), utilizando anticuerpos monoclonales frente a marcadores fenotípicos (FcεRI, C-kit y VCAM) y marcadores funcionales (Quimasa y Triptasa). Se obtuvo RNA total proveniente de 6 (13.0%) muestras que fueron llevadas análisis transcriptómico usando tecnología DNBSEQ-G400. El análisis estadístico descriptivo e inferencial se realizó usando IBM-SPSS V26 para Windows y el análisis bioinformático usando el software CLC Genomics 23.0.3 de Qiagen. Resultados: Para procesamiento por IHC las hDP sanas presentaron un 37.5% de hDPMC triptasa+, y un 33.3% de este fenotipo en pulpas dentales inflamadas (S-hDP), localizadas en regiones perivasculares en las dos condiciones clínicas, y particularmente en la porción radicular de la S-hDP. Aunque hubo una tendencia a la reducción de las MCs en S-hDPs, no se observaron diferencias significativas en los conteos de hDPMC según diagnóstico (p=0.059). La evaluación por FACs demostró la presencia únicamente hDPMC triptasa+ en todas las muestras analizadas. Se observó una abundancia relativa media para triptasa de 45.1  26.4% en H-hDP y 47.5  15.2% en S-hDP, sin diferencias significativas entre los dos diagnósticos (p=0.462). El análisis transcriptómico relacionado con los genes asociados a MCs en S-hDP muestra una regulación negativa en la expresión de los genes que codifican para quimasa, triptasa, y carboxipeptidasa A 3, con relación a los MCs de H-hDPs se evidencia una sobreexpresión del gen RGS13, el cual codifica para la proteína con el mismo nombre la cual ha sido reportada como una molécula antagonista de los procesos inflamatorios mediados por la activación del MC en las reacciones de hipersensibilidad, que se comporta como un mecanismo supresor de las respuestas inflamatorias en tejidos con rasgos clínicos de inflamación pulpar. Conclusión: Los resultados obtenidos permiten afirmar que el MC es una célula que se encuentra presente tanto en S-hDPs como en H-hDP demostrando un perfil fenotípico ctMC localizada en las regiones perivasculares y a nivel radicular en tejidos inflamados, con una gran plasticidad de acuerdo a su microambiente que le otorga no solamente cualidades proinflamatorias sino también moduladoras