Dissertation
Produção de anticorpos contra TcHIP e cruzipaína de Trypanosoma Cruzi com aplicação no estudo de endocitose em amastigotas
Fecha
2014Registro en:
BATISTA, Cassiano Martin. Produção de anticorpos contra TcHIP e cruzipaína de Trypanosoma cruzi, com aplicação no estudo de endocitose em amastigotas. 2014. 90 f. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia) - Instituto Carlos Chagas, Fundação Oswaldo Cruz, 2014.
Autor
Batista, Cassiano Martin
Institución
Resumen
A endocitose é um evento biológico já bem descrito em formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, onde macromoléculas são internalizadas através da bolsa flagelar e/ou do complexo citóstoma/citofaringe e direcionadas aos reservossomos. Reservossomos são grandes organel estocam moléculas ingeridas e cruzipaína. O objetivo desta dissertação foi produzir anticorpos policlonais ou monoclonais (mAbs) contra proteínas identificada (cruzipaína e TcHIP), e utilizá
estudos de endocitose em formas amastigotas de foram expressas em E. coli reatividade dos anti-soros foi confirmada por
cruzi e contra proteína recombinante. Imunolocalização utilizando anticorpos policlonais anti-TcHIP mostrou que esta proteína está presente no complexo de Golgi em T. cruzi, o que foi confirmado por co
anticorpos policlonais obtidos contra cruzipaína recombinante demonstraram esta
proteína no Golgi e em reserv
mAbs, esplenócitos de um camundongo imunizado com cruzipaína recombinante foram
fusionados com células de mieloma da linhagem P3X63Ag8.653 (ATCC CRL
Os hibridomas foram triados p
hibridoma mais estável foi
cruzipaína recombinante (mAb CZP
Este anticorpo foi utilizado como ferramenta pa
transferrina ingerida com a cruzipaína em formas amastigotas. Foi também possível
demonstrar pela primeira vez por citometria de fluxo a atividade endocítica em formas
amastigotas de T. cruzi.
Trypanosoma cruzi, organelas localizadas na região posterior do parasito que
contém enzimas lisossomais, como por exemplo a identificadas na proteômica de reservossomos utilizá-las como marcadores de organelas da via endocítica e em
T. cruzi. Proteínas recombinantes
coli, purificadas e inoculadas em camundongos Balb/c. A western blot contra extrato total de, co-localização com TcRab7-GFP. Por outro lado,
reservossomos de epimastigotas de T. cruzi.