Thesis
Identificação e caracterização dos mecanismos de resistência ao antimônio em isolados clínicos de Leishmania braziliensis obtidos de lesões atípicas
Fecha
2019Registro en:
RUGANI, Jeronimo Marteleto Nunes. Identificação e caracterização dos mecanismos de resistência ao antimônio em isolados clínicos de Leishmania braziliensis obtidos de lesões atípicas. 2019. 90 f. Tese (Doutorado em Ciências da Saúde)-Instituto René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte, 2019.
Autor
Rugani, Jeronimo Marteleto Nunes
Institución
Resumen
As leishmanioses cutâneas (LC) e mucocutâneas (LM) são causadas por várias espécies de Leishmania sendo a mais importante no Brasil a L. braziliensis. Um aspecto importante da LC causada por essa espécie é a ocorrência de lesões atípicas não-ulceradas que podem não responder ao tratamento com antimônio (Sb). Deste modo, o principal objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a susceptibilidade de L. braziliensis obtidas de pacientes com lesões típicas e atípicas aos agentes antileishmania utilizados na prática clínica – anfotericina B (AmB), miltefosina (MIL) e glucantime (GLU). Todos os isolados foram sensíveis à AmB e MIL, sendo que este último, apesar de eficaz, apresenta baixa correlação entre a taxa de infecção e o número de amastigotas/macrófago. Apenas os isolados de L. braziliensis provenientes de lesões atípicas (316, 330 e 340) foram resistentes ao Sb (SbR) e apresentaram menor infectividade em macrófagos THP-1. A resistência ao Sb foi atribuída à redução de incorporação do fármaco, como revelado pelo ensaio de quantificação de Sb intracelular utilizando absorção atômica, associada ao aumento de transcritos dos genes ARM56 e ARM58. A diminuição nos níveis de mRNA de AQP1 corroborram os achados funcionais de redução do acúmulo de Sb em parasitos SbR. O sequenciamento do gene que codifica para AQP1 revelou a presença de polimorfismos exclusivos tanto em cepas isoladas de lesões típicas como atípicas, apesar dessas mutações serem silenciosas. Não houve diferença entre os isolados clínicos de L. braziliensis frente ao choque hiposmótico. Leishmania braziliensis isolada de lesões típicas e sensíveis ao Sb apresentaram níveis de transcritos que codificam para gama-glutamil cisteína sintase e do transportador ABCI4, ambos alvos associados ao metabolismo de Sb. A incorporação diferencial de Sb em isolados clínicos de L. braziliensis nos levou a testar o papel de glicoconjugados da superfície dos parasitos na entrada de Sb. Para isso, o isolado 346 – que apresentou maior acúmulo de Sb – foi incubado na presença do anticorpo CA7AE, cuja função de aglutinação de glicoconjugados parece favorecer a entrada de Sb e pode ser utilizado como ferramenta para melhor compreender a dinâmica de transporte do Sb. Estes dados destacam a importância de se caracterizar molecular e funcionalmente isolados clínicos de Leishmania spp. com o intuito de identificar previamente a resistência a fármacos e guiar a escolha do melhor tratamento. A identificação concomintante de diferentes marcadores pode ser utilizada com estratégia para desenvolver uma ferramenta/kit preditivo voltado para a vigilância e controle das leishmanioses.