Variação de Número de Cópias em Genes Relacionados à Resistência aos Antimaláricos em Isolados de Plasmodium spp. do Brasil

Abstract

Um dos maiores desafios do controle da malária é a resistência do parasito aos antimaláricos. A biologia molecular tem permitido a c ompreensão desse fenótipo com o estudo de marcadores associados a ela, tais c omo o Polimorfismo de Base Única (SNP) e o Polimorfismo de Variação de Número de Cópias Gênicas (CNV). Alterações gênicas atribuídas ao CNV podem levar a alt erações fenotípicas no parasito, conferindo resistência ou suscetibilidade aos antimaláricos. Sua presença foi relacionada com a falha terapêutica a drogas com o cloroquina (CQ) e mefloquina (MQ) em diversas regiões do mundo. Os genes pfmdr1 e pfgch1 de P. falciparum e pvmdr1 de P. vivax são relacionados com resistência a diferentes fármacos. Entretanto, no Brasil poucos estudos carac terizaram esses genes quanto à presença de CNVs, sendo que sua maioria investigou a diversidade genética associada aos SNPs. O objetivo deste estudo foi inves tigar a presença de CNV nos genes pfmdr1 e pfgch1 de P. falciparum e pvmdr1 e pvcrt-o de P. vivax , assim como SNPs nos genes pfcrt e pfmdr1 de P. falciparum . O CNV foi determinado por qPCR utilizando sondas de hidrólise e os SNPs por PCR-RFL P. As amostras foram coletadas entre 2002 a 2012, em 3 diferentes estado s brasileiros – Mato Grosso (n=31), Rondônia (n=27) e Amapá (n=10). As 31 amostr as analisadas de P. falciparum apresentaram cópia única para pfmdr1 e pfgch1 , apesar do histórico de resistência do parasito a vários antimaláricos util izados ao longo do tempo no Brasil. Entretanto, um importante SNP em pfcrt (K76T), relacionado com resistência à CQ, foi identificado em todas as amostras analisa das. Nesse estudo, também foram analisados 38 isolados de P. vivax , sendo reportado a amplificação gênica em 7 (18%) amostras para pvmdr1. No sudoeste asiático altas taxas de CNV em pvmdr1 foram reportadas (38%), sendo relatado por um único estudo no Brasil (0,9% de amplificação). Um resultado importante des se estudo foi a observação, pela primeira vez, da amplificação de pvcrt-o . Embora estudos anteriores o associem com resistência e casos graves da doença, n enhum avaliou a presença de CNV em pvcrt-o . Este estudo é um dos primeiros a avaliar a presen ça de CNV nos genes pvmdr1 , pvcrt-o e pfgch1 no Brasil, assim como estudar a distribuição de CNV no mundo através de uma revisão sistemática.