Dissertation
Caractetização proteica do fluido aspirado de mama de pacientes brasileiras com câncer de mama unilateral
Fecha
2010Registro en:
BRUNORO. G. V. F. Caracterização proteica do fluido aspirado de mama de pacientes brasileiras com câncer de mama unilateral. 2010. 104 f. Dissertação(Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2010
Autor
Brunoro, Giselle Villa Flor
Institución
Resumen
O câncer de mama é a principal causa de morte por câncer em mulheres no mundo. De
acordo com o Instituto Nacional do Câncer, 7.470 novos casos são estimados em 2010
apenas no Rio de Janeiro. A maioria dos casos de câncer de mama são originados nas células
ductais mamárias. Elas secretam o fluido aspirado de mama (NAF), que contém proteínas
intimamente associadas ao microambiente tumoral. O objetivo deste trabalho foi utilizar a
abordagem proteômica como ferramenta para caracterizar e comparar o NAF das duas
mamas de pacientes brasileiras com câncer da mama unilateral. A concentração média de
proteínas das amostras controle, tumor benigno ou câncer de mama de 13 mulheres foi
aproximadamente 115 ± 60 μg/μL. A atividade proteolítica do NAF foi visualizada por
zimografia das amostras de duas pacientes. Observamos que o padrão de bandas
gelatinolíticas diferiu substancialmente entre as pacientes, mas não entre as duas mamas do
mesmo indivíduo. As enzimas proteolíticas se apresentaram sensíveis à inibição por agentes
quelantes de metais (EDTA e orto-fenantrolina). As amostras de NAF também foram
submetidas à 2D-PAGE em condições otimizadas (IPG 4-7 e aplicação de amostra por
reidratação in gel) e poucos spotsproteicos muito abundantes foram detectados e
identificados por espectrometria de massas MALDI-TOF/TOF como albumina,
imunoglobulinas, zinco-α2-glicoproteína e proteína induzida por prolactina. Para enriquecer
o NAF em suas proteínas menos abundantes, testamos estratégias de depleção usando a
coluna de múltipla afinidade Hu-6 da Agilent ou proteína L agarose. Este passo de pré-fracionamento introduziu variabilidade adicional importante nas amostras e por este motivo
não foi empregado em etapas posteriores do estudo. Catorze amostras de NAF das mamas
pareadas de mulheres com câncer unilateral foram sistematicamente comparadas por 2D-DIGE. Foram observadas diferenças qualitativas substanciais entre as pacientes,
prejudicando as comparações quantitativas entre as amostras. Dois grandes perfis proteicos
distintos foram definidos por 2D-DIGE. O perfil A caracterizou-se pela presença de dois
grupos de spotsácidos típicos (pI ≈ 4,5 e MM 29,5 e 18 kDa), ausentes no perfil B. A
presença de glico- e fosfo-proteínas foi determinada em amostras de ambos os perfis após
revelação dos géis 2D com ProQ- Emerald ou Diamond,respectivamente. As amostras dos
dois perfis se mostraram muito mais ricas em glicoproteínas do que em fosfoproteínas. Este
trabalho constituiu a primeira caracterização proteômica sistemática do NAF de pacientes
brasileiras com câncer de mama unilateral. Nossos resultados mostraram uma variabilidade
importante do conteúdo de proteínas nas amostras individuais de NAF, sugerindo a
necessidade de uma estratificação mais uniforme daspacientes. Por fim, o emprego de
tecnologias proteômicas mais sensíveis e acuradas deverá ser necessário para possibilitar a
detecção e identificação de proteínas menos abundantes no NAF, que poderão constituir
candidatos a biomarcadores do câncer de mama.