Estudo da interação entre Trypanosoma caninum e células macrofágicas: aspectos morfológicos, biológicos e ultraestruturais

Abstract

Trypanosoma caninum é um tripanosomatídeo até então isolado apenas da cultura de pele íntegra de cães. No cultivo axênico apresenta as formas evolutivas: epimastigota aflagelar e flagelar, tripomastigota e esferomastigota. Inúmeros aspectos sobre T. caninum ainda precisam ser investigados, dentre eles em relação ao potencial infectivo das formas evolutivas. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar aspectos morfológicos, biológicos e utraestruturais da interação de T. caninum com células macrofágicas in vitro. Inicialmente, foi realizada curva de crescimento, análise e quantificação das formas evolutivas de T. caninum em meio axênico e em cocultivo com a linhagem celular DH82. Em seguida, foi realizada análise ultraestrutural das formas de T. caninum cultivadas em meio axênico e cocultivo com linhagem celular DH82. Com intenção de conhecer o potencial infectivo da forma epimastigota aflagelar foi realizado estudo de interação T. caninum com a linhagem de macrófago canino DH82 e macrófago peritoneal (M\0278) de camundongos BALB/c, em duas condições: em meio DMEM F12 suplementado com SFB e a outra com meio suplementado com BSA. Toda cinética ocorreu em 7 tempos: 15, 30 e 45 minutos e 2, 6 ,24 e 48 horas. A análise da interação foi realizada por microscopia óptica de campo claro (MCC), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET). Para análise quantitativa e estatística foram contabilizados total de células infectadas, com parasitos aderidos e parasitos interiorizados por células infectadas. A curva de crescimento de T. caninum em meio axênico e em cocultivo apresentaram o mesmo perfil, porém no meio axênico foi observada no pico da fase exponencial quase quatro vezes mais parasitos que no cocultivo. Diferente do cultivo axênico, no qual foi observada apenas as formas epimastigotas, durante o cocultivo com a linhagem celular DH82 foi observada diferenciação para forma tripomastigota e esferomastigota. A análise ultraestrutural demonstrou que T. caninum possui estruturas descritas para as espécies de tripanosomatídeos, com destaque para inúmeros corpúsculos lipídicos ao longo do corpo. Em relação a interação T. caninum-macrófagos foram obtidos resultados inéditos: T. caninum é capaz de infectar células, a forma epimastigota aflagelar é infectiva para macrófagos e foi verificada a existência de formas amastigotas de T. caninum. Já no tempo de 15 minutos, a forma epimastigota aflagelar de T. caninum adere e entra nas células, rapidamente, modifica-se para a forma amastigota dentro do vacúolo parasitóforo. Dentro deste vacúolo ocorre divisão de amastigotas. Algumas amastigotas são digeridas pelas células e outras viáveis são liberadas, como observado por MET nos tempos de 45 minutos em interação com M\0278 e no tempo de 6 horas na interação com a linhagem DH82. No meio extracelular, em algumas amastigotas ocorre mudança para epimastigota aflagelar e outras interagem com a célula para reinfecção. Foi observada diferença significativa em relação a infecção entre as duas células e em relação a células nas quais ocorriam adesão e infecção simultaneamente na condição com SFB. Esta dissertação apresenta resultados inéditos sobre o conhecimento dos eventos ocorridos durante a interação T. caninum-células que são úteis no entendimento sobre aspectos biológicos e da relação parasito-hospedeiro.