Dissertation
Avaliação das alterações celulares induzidas pela naftopterocarpanoquinona LQB-118 em Leishmania amazonensis
Fecha
2011Registro en:
RIBEIRO, G. A. Avaliação das alterações celulares induzidas pela naftopterocarpanoquinona LQB-118 em Leishmania amazonensis. 2011. 119f. Dissertação (Mestrado em Biologia
Celular e Molecular) - Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2011.
Autor
Ribeiro, Grazielle Alves
Institución
Resumen
As leishmanioses constituem um conjunto de doenças negligenciadas que afetam cerca de 12
milhões de indivíduos em mais de 80 países. Os medicamentos utilizados no controle da
infecção estão associados à baixa eficácia, alta toxicidade, dificuldade de administração, altos
custos e crescente resistência. Na busca por agentes mais eficazes, uma série de
naftopterocarpanoquinonas foram projetadas e sintetizadas, das quais a LQB-118 mostrou-se
a mais ativa. Esse trabalho teve como objetivo avaliar os possíveis mecanismos de ação da
LQB-118 sobre Leishmania amazonensis, identificando as organelas alvo e o tipo de morte
desencadeado no parasito. Alterações morfológicas foram avaliadas por microscopia
eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). Os resultados
de MEV mostraram que a LQB-118 induziu retração celular e arredondamento nas
promastigotas tratadas, que tornaram-se significativamente menores. Os resultados de MET
mostraram que promastigotas tratadas com 2,5μM de LQB-118 apresentaram desestruturação
no complexo de Golgi e número aumentado de vacúolos no citoplasma. Promastigotas
incubadas com 10μM de LQB-118 apresentaram-se com citoplasma rarefeito, compactação da
cromatina, mitocôndria com matriz elétron-densa e cristas dilatadas, e protuberâncias na
membrana plasmática (blebs). Ensaios realizados por citometria de fluxo mostraram que o
tratamento com 5μM de LQB-118 induziu exposição de fosfatidilserina indicativa de
apoptose em 30% dos parasitos. A LQB-118 induziu a perda do potencial de membrana
mitocondrial (m)
em 70% dos parasitos avaliados por marcação com rodamina em
citometria. Essa perda do m
foi confirmada por fluorimetria e mostrou ser concentração-dependente quando as promastigotas foram tratadas com 2,5, 5 e 10μM de LQB-118. O
tratamento das promastigotas com 2,5, 5 e 10M de LQB-118 por 48 horas induziu
fragmentação no DNA de 37%, 67% e 81% da células, respectivamente, conforme avaliado
pela técnica de TUNEL. Macrófagos tratados com LQB-118 não apresentaram exposição de
fosfatidilserina, perda do m, e fragmentação de DNA, mostrando que o composto age de
maneira setiva sobre os parasitos. Análises realizadas por microscopia de fluorescência
indicaram que esse agente também induziu fragmentação do DNA de amastigotas
intracelulares de L. amazonensis, sem provocar fragmentação do DNA da célula hospedeira.
Dessa forma, a LQB-118 parece provocar de maneira seletiva em L. amazonensis muitas das
alterações associadas ao processo de apoptose clássico. O colapso do potencial mitocondrial
do parasita pode ser um mecanismo plausível para a atividade leishmanicida da LQB-118, a partir do qual o processo de morte celular programada seria disparado.