Dissertation
Autofagia no Trypanosoma cruzi: produto do mecanismo de ação de naftoquinonas e da resposta ao estresse de pH e nutricional
Fecha
2012Registro en:
FERNANDES, Michelle Casal. Autofagia no Trypanossoma cruzi: produto do mecanismo de ação de naftoquinonas e da resposta ao estresse de pH e nutriciona. 2012. 109f. Dissertação (Mestrado) – Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Oswaldo Cruz, 2012.
Autor
Fernandes, Michelle Casal
Institución
Resumen
A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi,
representa um sério problema de Saúde Pública na América Latina, cujo
tratamento clínico é insatisfatório. Nesse contexto, muitos esforços têm sido
dirigidos para o desenvolvimento de novas drogas visando o tratamento desta
doença negligenciada. Na medicina popular, produtos naturais ricos em
naftoquinonas têm sido utilizados no combate de diferentes doenças
parasitárias. Nosso grupo vem investigando a atividade de naftoquinonas e
derivados sobre formas tripomastigotas de T. cruzi. No presente estudo, dentre
32 hidroxinaftoquinonas que tiveram sua atividade tripanocida avaliada, o
composto 1C foi o mais ativo (IC50/24h=77,3 ±6,8 μM). Estudos prévios do
nosso grupo com outra classe de derivados de naftoquinonas apontaram para
a naftoquinona triazólica (NT) como um composto promissor, sendo esta mais
ativa que a droga padrão benznidazol. Nesta dissertação, o mecanismo de
ação de NT foi estudado, sendo observados danos ultraestruturais em
epimastigotas como a ruptura dos reservosomos, blebbing da membrana
flagelar, desorganização do Golgi, aparecimento de estruturas membranares
concêntricas no citosol e parasitos anormais com múltiplos flagelos.
Diferentemente do tratamento com outras naftoquinonas, NT não induziu
alterações na mitocôndria, dado este confirmado pela análise do potencial de
membrana mitocondrial (Δm) por citometria de fluxo. Pela mesma técnica,
ainda foram demonstrados o efeito de NT no bloqueio da mitose e no aumento
da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). O principal fenótipo
induzido pelo tratamento com essa naftoquinona foi o aparecimento de perfis
de retículo endoplasmático envolvendo organelas, que juntamente com o
aumento da marcação com monodansilcadaverina (MDC) observado, sugere a
autofagia como parte do mecanismo de ação tripanocida da NT. O T. cruzi
apresenta-se em três diferentes formas evolutivas e durante seu ciclo de vida é
exposto a condições físico-químicas adversas como variações no pH e
escassez de nutrientes. A avaliação do efeito de tais condições se constituiu
em um dos objetivos deste estudo. Análises por citometria de fluxo
demonstraram que epimastigotas submetidos a estresse de pH e escassez
nutricional apresentaram um aumento na produção de EROs, sendo também
observada uma queda do Δm apenas após estresse de pH. A microscopia
eletrônica de transmissão revelou um inchaço mitocondrial com
desorganização das cristas, presença de estruturas membranares concêntricas
citosólicas e no interior de organelas, perfis de retículo endoplasmático
envolvendo estruturas subcelulares, perda de eletrondensidade dos
reservosomos com invaginação da sua membrana e intensa vacuolização
citoplasmática. Estes fenômenos característicos de autofagia, reforçados pela
ausência de ruptura de membrana plasmática, de fragmentação do DNA e pelo
aumento na marcação de MDC, indicam que esta via participa da resposta do
protozoário aos diferentes tipos de estresses induzidos.