Resumo - O objetivo deste trabalho foi determinar como diferentes métodos de fermentação e meios de cultura influenciam na produção de cercosporina de Cercospora aff. canescens (CMAA 1444). O isolado foi selecionado como candidato a mico-herbicida no controle de cordas-de-viola. Os ensaios foram realizados utilizando a fermentação submersa e fermentação sólida e doze combinações do meio de cultura Czapek-Dox modificado. Na fermentação submersa foram utilizados Erlenmeyers contendo 5 discos de micélio do isolado e mantidos em agitador orbital (150 rpm) a 25°C. Na fermentação sólida foram utilizadas placas de Petri contendo quatro discos de micélio e mantidas em incubadora tipo BOD, a 25°C. Nos ensaios, os fotoperíodos adotados foram 0, 12, ou 24 h. Após 21 dias, as extrações dos metabólitos com solvente de acetato de etila foram realizadas a partir da biomassa e da fração líquida obtida da fermentação submersa, e da biomassa obtida da fermentação sólida. Os extratos foram submetidos à análise de cromatografia em camada delgada visualizadas a ?= 365 nm e os resultados comparados com o padrão analítico de cercosporina. Os metabólitos obtidos da fermentação submersa indicaram a produção de diversos compostos não identificados. O metabólito obtido da fermentação sólida apresentou similaridade com o padrão analítico de cercosporina, utilizando meios de cultura compostos pela combinação de 1 g de nitrato de cálcio e variações de dextrose (22,5, 45 e 4,5 g), de sulfato de magnésio e fosfato de potássio (1, 2,5 e 0,25 g), independente do fotoperíodo.