O Gir Leiteiro é considerado a raça zebuína de maior produtividade leiteira em clima tropical, uma vez que pode produzir em média 12 kg de leite por dia, o que justifica sua ampla utilização em programas de melhoramento genético no Brasil. Outra raça de grande importância para a produção de leite é a raça Holandesa, devido aos seus longos períodos de lactação e alta produtividade. Desta forma, a genotipagem dos touros de ambas as raças é de extrema importância para garantir a viabilidade dos animais utilizados na pecuária leiteira e assim diminuir a frequência de alelos deletérios nos rebanhos. A Brachyspina (BS) é uma síndrome genética recessiva letal identificada primeiramente em animais da raça Holandesa, que comumente causa aborto precoce e em casos raros bezerros natimortos. Não há nenhum caso relatado de BS em animais da raça Gir até o momento na literatura. Assim, este estudo objetivou genotipar 774 touros da raça Gir e 60 da raça Holandesa para o gene da BS por meio da técnica de PCR multiplex. Foram encontrados 4 touros portadores do alelo recessivo na raça Holandesa, sendo que a frequência alélica foi de 3,3% e a genotípica de 6,6% e nenhum Gir foi portador.