Mecanismos de regulação da expressão de RNAm de VDR em células HC11 parentais ou transformadas com Hras

Abstract

Objetivo: A linhagem epitelial mamaria murina, HC11, apresenta maior conteudo de RNAm de receptor de vitamina D (VDR) que celulas transformadas com Ha-ras (HC11 ras). Quando HC11 e tratada com 1,25(OH)2D3 (VD), ocorre diminuicao de proliferacao, nao observada em HC11 ras. E necessario, portanto, esclarecer por que as celulas HC11 ras expressam menos VDR e se este e funcional. Metodos e Resultados: 0 ensaio de Run On foi utilizado para esclarecer se houve transcricao diferenciada do gene. Ambas as linhagens apresentaram a mesma taxa de sintese de RNAm de VDR. Atraves de tratamento com actinomicina D, um inibidor de transcricao genica, foi possivel calcular a meia-vida do RNAm de VDR. A linhagem HC11 ras apresentou degradacao maior do RNAm de VDR quando comparada com a linhagem parental (HC11). Para verificar a funcionalidade de VDR estudamos a expressao do RNAm de 25(OH)D3-24 hidroxilase, gene alvo que apresenta um elemento de resposta (VDRE) a vitamina D em seu promotor. Em celulas HC11 parentais, nao observamos a expressao de RNAm de 25(OH)D3-24 hidroxilase por Northern Blot, o qual nao foi indutivel por VD. Por outro lado, nas celulas HC11 ras ocorre expressao constitutiva deste gene, o qual tambem nao e induzido pela VD nestas celulas. 0 bloqueio da via de Ras, obtido apos tratamento com o inibidor de farnesil-transferase, levou as celulas HC11 ras a expressarem niveis similares de RNAm de VDR aqueles mostrados pelas celulas HC11. Conclusoes: A expressao diferencial de RNAm de VDR entre celulas HC11 parentais ou transformadas com Ha-ras nao resulta de diferencas na taxa de sintese mas sim do efeito de uma maior degradacao do RNAm de VDR. A menor expressao de RNAm de VDR encontrada em celulas HC11 transformadas com Ha-ras em relacao as celulas parentais parece estar relacionada a presenca de Ras ativado, uma vez que a inibicao desta via, reverte os niveis de RNAm de VDR aos das celulas parentais. Em celulas transformadas com o oncogene Ha-ras houve expressao constitutiva do gene da 25(OH)D3-24 hidroxilase, indicando uma possivel inativacao metabolica da vitamina D endogena nestas celulas, sugerindo a inexistencia de uma via degradativa da VD em celulas mamarias murinas normais