Mapeamento, análises químicas e imunoquímicas do glicoesfingolipídeos em invertebrados

Abstract

Este estudo analisou o perfil cromatografico dos glicoesfingolipideos neutros e gangliosideos de 18 invertebrados. Glicoesfingohpideos (GSLs) totais foram purificados em colunas de DEAE-Sephadex e Florisil. Em todas as amostras de GSLs neutros observou-se monohexosil ceramida (CMH). Os GSLs foram quantificados apos fracionamento por cromatografia de alta resolucao em camada delgada (HPTLC) e coloracao com orcinol por densitometria 525 nm. As concentracoes totais de GSLs neutros variaram de 0,1 g de GSLs/g de tecido na renda a 93,50 g de GSLs/g de tecido no tenebrio. Estudos sobre a identificacao dos CIXIS foram realizados apos purificacao por HPTLC preparativa. As bandas de CI~IS puras foram submetidas a hidrolise acida total com acido trifluoroacetico e o acucar encontrado em quase todos os CXIHs dos invertebrados foi a glucose. Residuos de manose foram observados nos CNIFIs da bolacha-do-mar, grilo, abelha e besouro, e fucose somente no CXZI-IP1 do pepino-do-mar. Por hidrolise acida total, para a identificacao dos acucares dos diferentes CDHs, detectou-se a presenca de residuos de glucose, galactose e manose. A partir dos fitos Echinodermata e Xfollusca foram detectados, em concentracoes relevantes, GSLs neutros com cadeias mais longas como CDH, CTH e globosideo, sugerindo que animais filogeneticamente superiores a Platyhelminthes expressam uma maior diversidade de glicosiltransferases. Entre 18 invertebrados estudados, somente quatro animais apresentaram gangliosideos com concentracoes totais que variam de 1,26 g de GSLs/g de tecido no pepino-do-mar a 9,60g de GSLs/g de tecido na bolacha-do-mar. A presenca de CMHs contendo acidos graxos 2-hidroxilados foi analisada por imunocoloracao de placas de HPTLC utilizando o mAb MEST-2. CMHs reativos com o mAb MEST-2 foram detectados em: esponja, anemona-do-mar, pepino-do-mar e marisco. Os CMHs foram tambem analisados por radioimunoensaio de fase solida quanto a reatividade com mAb MEST-2. Os diferentes CMHs apresentaram reatividade simililares as obtidas por imunocoloracao de placas de HPTLCa(au)