Influência da via Wnt na proliferação de células B-1 de camundongos ao longo do envelhecimento

Abstract

O aparecimento de doenças hiperproliferativas, como a leucemia linfocítica crônica (LLC), está diretamente relacionado a problemas no processo de apoptose das células como também à imunossenescência. Estudos mostraram que com o avanço da idade ocorre aumento da população de células B-1 (tipo celular que é encontrado nessa doença). Isso leva à hipótese que a expansão clonal destas células possa estar relacionada à imunossenescência. A via Wnt clássica atua na proliferação de células B-1 maduras, enquanto a não clássica atua na expansão de seus precursores. Em experimentos do nosso grupo foi visto que precursores de B-1 obtidos de animais idosos (30 semanas) não se comportam da mesma forma que precursores obtidos de animais jovens (8 semanas). Houve diferenças entre os grupos no número de precursores ao longo do envelhecimento e na proliferação destes após cultivo com ligantes da via Wnt. Isso aponta para a possibilidade de relação entre os precursores e doenças hiperproliferativas. Porém, ainda não foi estudado se há diferenças na resposta de células B-1 maduras ao longo do envelhecimento após estes cultivos. Assim sendo, esse projeto visou avaliar a proliferação e viabilidade de células B-1 quando estimuladas por ligantes da via Wnt clássica e não clássica, além de analisar a expressão de microRNAs associados ao processo de apoptose e que se mostram desregulados na LLC. Os resultados apresentados aqui são referentes a células B-1 em cultura com células estromais OP9 WT. As células B-1 de camundongos idosos apresentaram maior proliferação in vitro do que as células de jovens. Isso pode ser relacionado à prevalência da LLC, que ocorre em pessoas idosas. Estas células também apresentaram expressão de miR-181 diminuída em relação à B-1 jovem após a co-cultura. Este miRNA tem importante papel na regulação de moléculas envolvidas na apoptose e regula MCL-1, envolvido na via de IL-6. Importantemente, foi vista maior secreção de IL-6 no sobrenadante das culturas com células obtidas de animais idosos. Assim, evidencia-se aqui estas moléculas como alvos para futuros estudos no campo da B-1, envelhecimento e doenças hiperproliferativas como a LLC.

The appearance of hyperproliferative diseases, such as chronic lymphocytic leukemia (CLL), is directly related to problems in the cell apoptosis process, as well as the immunosenescence brought by advancing age. Studies have observed that with age there is an increase in the population of B-1 cells (type of cell that is found in this disease). This leads to the hypothesis that immunosenescence is related to the clonal expansion of these cells. The classic Wnt pathway acts in the proliferation of mature B-1 cells, while the non-classical one acts in the expansion of their precursors. In experiments by our group, it was seen that B-1 precursors obtained from elderly animals (30 weeks) do not behave in the same way as precursors obtained from young animals (8 weeks). There were differences between the groups in the number of precursors during aging and in their proliferation after cultivation with Wnt pathway ligands. This points to the possibility of a relation between precursors and hyperproliferative diseases. However, it has not yet been studied whether there is a difference in the response of mature B-1 cells during aging after these cultures. Therefore, this project aimed to evaluate the proliferation and viability of B-1 cells when stimulated by ligands of the canonical and non-canonical Wnt pathway, in addition to analyzing the expression of microRNAs related to the apoptosis process and which are shown to be deregulated in CLL. The results described herein refer to B-1 cells in culture with OP9 WT stromal cells. B-1 cells from aged mice showed greater in vitro proliferation than cells from young ones. This may be related to the prevalence of CLL, which occurs in the elderly. These cells also demonstrated decreased miR-181 expression relative to young B-1 after co-culture. This miRNA plays an important role in the regulation of molecules involved in apoptosis and regulates MCL-1, involved in the IL-6 pathway. Importantly, increased secretion of IL-6 was seen in the supernatant of cultures with cells obtained from aged animals. Thus, these molecules are pointed here as targets for future studies in the field of B-1, aging and hyperproliferative diseases such as CLL.