Identificação e caracterização de inibidores de a-amilases e serinoproteases em sementes de Araucaria angustifolia

Abstract

As sementes de pinhao (Araucaria angustifolia) caracterizam-se pelo teor relativamente alto de amido e proteinas. O presente trabalho teve como objetivo verificar a presenca de inibidores de µ-amilase nas sementes do pinhao e a caracterizacao de atividade inibitoria de tripsina detectada no embriao dessas sementes. A metodologia empregada na purificacao consistiu de extracao salina das proteinas, deslipidacao com hexano, precipitacao cetonica e cromatografia de afinidade. A SDS-PAGE mostra duas formas de inibidores de 35 kDa e a determinacao precisa da massa molecular foi possivel por cromatografia de fase reversa acoplada a espectrofotometro de massa. Os valores foram 36,955 kDa (AaTI-1) e 35,450 kDa (AaTI-2). A sequencia da regiao N-terminal mostra similaridade estrutural com inibidores da familia serpina de plantas. A mistura das formas AaTI-1 e AaTI-2, identificada como AaTI, mostra seletividade de inibicao para tripsina (Kiapp 85 nM) e plasmina (Kiapp 7,04 μM), mas nao interfere na atividade da quimotripsina, calicreina plasmatica humana, calicreina pancreatica de porco e outras enzimas da coagulacao visto que o inibidor nao altera o TTPa e o TP