Tese de doutorado
Identificação de domínios de evolução neutra no DNA mitocondrial de Candida albicans e suas possíveis aplicações em tipagem
Fecha
2012Registro en:
São Paulo: [s.n.], 2012. 92 p.
epm-2071116193664.pdf
Autor
Bartelli, Thais Fernanda [UNIFESP]
Institución
Resumen
fungo comensal humano Candida albicans e um patogeno oportunista que diante de imunossupressao do hospedeiro pode causar desde infeccoes muco-cutaneas simples ate graves infeccoes hematogenicas hospitalares. Por ser um agente etiologico importante de infeccoes nosocomiais, sao necessarios metodos eficientes de tipagem que permitam a distincao entre cepas proximamente relacionadas e consequentemente a identificacao da fonte de infeccao hospitalar. O DNA mitocondrial e indicado para estudos filogeneticos de organismos muito proximos (microevolucao) por apresentar taxa de mutacao mais elevada e evolucao mais rapida que o DNA nuclear. Para identificar regioes hipervariaveis intraespecificas no DNA mitocondrial, neste trabalho foram sequenciados, com COBertura de oito vezes, os genomas mitocondriais de dois isolados clinicos de C. albicans e suas sequencias foram comparadas com a do genoma da linhagem de referencia SC5314. Como revelado pelo alinhamento dos genomas, dos 33.928 sitios analisados, 372 foram polimorficos (variacao global de 1,1 %), sendo 230 localizados em suas regioes codificadoras e 142 nas nao codificadoras. Tres regioes intergenicas, localizadas entre os genes tRNA-Gly / COX1, NAD3 / COB e ssuRNAr / NAD4L, apresentaram maior numero de substituicoes neutras e foram investigadas quanto ao seu potencial para utilizacao em tipagem molecular. Para isto, estas tres regioes intergenicas mitocondriais foram amplificadas e sequenciadas em 18 isolados clinicos de C. albicans de diferentes locais da America Latina, alem de duas linhagens padrao ATCC. Nestas regioes, foi observada grande variacao tanto na sequencia nucleotidica quanto no tamanho, com variacao de ate 56pb no tamanho da sequencia entre as cepas e frequencia de alteracao nucleotidica de 4,24%. Arvores filogeneticas das linhagens revelaram a existencia de tres grupos, sendo um deles formado quase exclusivamente por cepas originarias da Argentina. As sequencias dessas cepas apresentaram insercoes de ate 49pb, indicando que estes segmentos podem ser utilizados como marcadores geograficos. Estes resultados indicam que o DNA mitocondrial, em especial as regioes intergenicas, sao ferramentas moleculares uteis para diferenciacao de diferentes isolados clinicos proximamente relacionados e estudos populacionais de C. albicans, devido a sua grande variabilidade e facilidade de obtencao por PCR e sequenciamento