Trabalho de conclusão de curso de graduação
Aplicação de isoforma de lacase purificada de meio de cultura do fungo endofítico xylaria sp. para promoção de crosslinking in vitro em córneas de abatedouro
Fecha
2023-01-16Autor
Lins, Bruna Vitoria Oliveira [UNIFESP]
Scomparim, Giulia [UNIFESP]
Kim, Steffany Ji Hee [UNIFESP]
Institución
Resumen
O ceratocone é uma doença corneana progressiva, bilateral e assimétrica,
caracterizada por afinamento estromal e subsequente ectasia da córnea central e
paracentral, com protrusão cônica, que provoca astigmatismos irregulares e miopia e
proporciona baixa acuidade visual. As alterações visuais decorrentes desta ectasia
podem ser controladas de diferentes formas, a depender da sua progressão. Neste
contexto, o corneal crosslinking (CXL) permite estabilizar a progressão do ceratocone
em córneas onde não há afinamento severo, utilizando a riboflavina como
fotossensibilizador, seguida de exposição à luz ultravioleta A (UVA), para melhorar a
estabilidade biomecânica e a resistência enzimática da córnea, retardando ou
interrompendo a progressão da condição através da indução de ligações cruzadas no
estroma. Entretanto, alguns estudos têm associado diversas complicações ao método
convencional de CXL, tais como a perda e polimorfismos de queratócitos, perda de
células endoteliais, com danos estruturais e funcionais persistentes, opacificações e
perfurações de córnea, achatamento e ceratite secundária. Portanto, métodos
alternativos para a obtenção de ligações cruzadas no estroma devem ser
considerados, como por exemplo através de oxidorredutases, enzimas que catalisam
reações de oxi-redução formando ligações cruzadas covalentes em proteínas, como
o colágeno. Neste contexto, a enzima lacase surge como um composto natural com
atividade potencial para a promoção de ligações cruzadas em córneas, apresentando,
ao mesmo tempo, efeito citotóxico muito reduzido, e portanto, maior viabilidade de
aplicação. Dessa forma, no presente estudo, obteve-se a enzima lacase por
fermentação do fungo endofítico Xylaria sp., seguida de sua purificação e aplicação
em crosslinking in vitro de córneas de porco de abatedouro. As córneas foram, então,
caracterizadas por resistência à degradação enzimática e perfil de desnaturação
térmica por calorimetria exploratória diferencial (DSC) para avaliar o potencial da
lacase como um método alternativo ao CXL tradicional. Nossos resultados
demonstram que o uso da enzima lacase em combinação com uma molécula fenólica,
a catequina, possui grande potencial na formação de ligações cruzadas in vitro,
reduzindo a taxa de degradação enzimática por colagenase e aumentando a
temperatura de desnaturação em ensaios de DSC. Isoladamente, a lacase produzida
pelo fungo endofítico Xylaria sp., quando comparada à comercial (Sigma-Aldrich),
vii
possui atividade de reticulação inferior. Entretanto, a combinação das lacases e
catequina, apresentou níveis similares de atividade, sem diferenças estatisticamente
significativas entre os grupos, demonstrando que a enzima produzida em nosso
projeto é igualmente funcional à comercial, quando utilizadas concomitantemente à
catequina, e que possui potencial considerável na promoção de ligações cruzadas no
estroma, sendo uma alternativa interessante ao método de CXL.