RESUMEN: Objetivo Caracterizar la microbiota bacteriana presente en los biosólidos generados en una de las plantas de tratamiento de aguas residuales más grande de Colombia. Materiales y Métodos Se utilizó la plataforma de secuenciamiento 454 de la compañía Roche para secuenciar las regiones variables V1-V3 y V6-V9 del marcador molecular 16S rRNA y caracterizar la microbiota. Adicionalmente, se aplicaron estrategias filogenéticas para la identificación de especies bacterianas de importancia. Resultados Nuestros análisis muestran que los Phyla más abundantes son Chloroflexi, Proteobacteria, Bacteroidetes, Actinobacteria y Firmicutes. Los géneros clasificados más abundantes fueron Pseudomonas, Dysgonomonas y Proteiniphilum. Sin embargo, el grupo dominante según la región variable V1-V3 es una Anaerolineaceaeque no se ajusta a las especies descritas para esta familia. Conclusiones En las muestras de biosólido analizadas predominan bacterias ambientales que participan en los procesos de estabilización de la materia orgánica durante los tratamientos biológicos de tipo secundario y la digestión anaerobia. Se detectaron secuencias de especies dentro de la familia Anaerolineaceae, los análisis filogenéticos muestran que probablemente se trata de especies no descritas. En el momento del estudio, se encontró que en el sistema de digestión anaerobia se genera biosolido con una baja carga de bacterias potencialmente patógenas.ABSTRACT: Objective To describe bacterial microbiota in the biosolids generated in one of the lar-gest wastewater treatment plants of Colombia.Materials and Methods Using NGS technology, 16S rRNA Gene Amplicon libraries were amplified and sequenced. The Roche 454 FLX Titanium platform was used, while the V1-V3 and V6-V9 hypervariable regions were amplified and analyzed inde-pendently. Amplicon processing and bacterial classification were performed using the AmpliconNoise pipeline and the RDP Classifier tool.Results The analysis showed that the most dominant Phyla in the biosolids were Chlo-roflexi, Proteobacteria, Bacteroidetes, Actinobacteria and Firmicutes. The most domi-nant genera were Pseudomonas, Dysgonomonas and Proteiniphilum; however, the dominant group according in the V1-V3 variable region was Anaerolineaceae, which does not conform to the species described for this family. Pathogenic bacteria such as Salmonella and E. coli/Shigella were not detected in the studied biosolid sample. Conclusions In the biosolids samples analyzed, environmental bacteria involved in organic matter stabilization processes during secondary biological treatments and anaerobic digestion were predominant. One of the dominant species in this sludge is a novel species of the Anaerolineaceae group. At the time of the study, it was found that the anaerobic digester system was able to maintain pathogenic bacteria at very low concentrations.0007506