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New methodology for the determination of microcistins in fish: Study of Astraloheros Facetus exposed in vitro
Nuevas metodologías para el análisis de microcistinas en peces: Estudio de Astraloheros Facetus expuestos in vitro;
Novas metodologias para a análise de microcistinas em peixes: Estudo de Astraloheros Facetus expostos in vitro
Autor
Badagian Baharian, Natalia
Letamendia, Maite
Pírez, Macarena
Carnevia, Daniel
Brena, Beatriz
Institución
Resumen
The high incidence of cyanobacterial blooms producing microcystins in Uruguay and its region, represent a very high risk for humans and animals. To study the impact and the presence of microcystins (MCs) in animals, it is important to use simple, low-cost methods. As a first approach to these objectives in fish, a sub-chronic bioassay (18 days) was performed with Astraloheros facetus (Castañetas) exposed to a Microcystis spp, bloom containing MCs (60 and 600 µg MCs/L). Even though there was no mortality, the histopathology showed fatty infiltration of the liver, which was more relevant in fish exposed to the highest concentration. To analyze MCs in tissues, two sensitive immunochemical methods based on a highly specific recombinant llama antibody (nanobody) were optimized: ELISA and quantitative MALDI-TOF, using functionalized magnetic particles. The methods were recently developed locally. The excellent correlation ELISA/MALDI-TOF (r Spearman = 0.988, p <10-7), highlights the potential of this ELISA as a simple and cost-effective tool to minimize the samples to be analyzed by reference methods. The concentrations of MCs in tissue of Astraloheros facetus were relevant, consistent with bioassays in other species and fish from nature. This highlights the importance of analyzing MCs in fish for consumption. La alta incidencia de floraciones de cianobacterias productoras de microcistinas en el país y la región representan un riesgo muy elevado para humanos y animales. A fin de estudiar el impacto y la presencia de las microcistinas (MCs) en animales, es importante disponer de métodos simples de bajo costo. Como primera aproximación a estos objetivos en peces, se estudiaron Astraloheros facetus (Castañetas) expuestas a una floración de Microcystis spp (MCs 60 y 600 µgMCs/L) en un bioensayo sub-crónico (18 días). Si bien no hubo mortalidad, la histopatología mostró infiltración grasa en el hígado, más relevante en los peces expuestos a la mayor concentración. Para analizar MCs en pescados se optimizaron dos métodos inmunoquímicos sensibles basados en un anticuerpo recombinante de llama (nanobody) de alta especificidad: ELISA y MALDI-TOF cuantitativo, utilizando partículas magnéticas funcionalizadas. Los métodos fueron recientemente desarrollados localmente. La excelente correlación ELISA/MALDI-TOF (rSpearman = 0,988, p< 10-7) resalta el potencial de este ELISA como herramienta simple y costo-efectiva para minimizar las muestras a analizar por métodos de referencia. Las concentraciones de MCs en las Castañetas fueron relevantes, acordes con bioensayos en otras especies y peces de la naturaleza. Esto destaca la importancia de analizar MCs en pescado para consumo. A alta incidência de florações de cianobactérias produtoras de microcistinas no país e na região representa um risco muito elevado para humanos e animais. Para avaliar o impacto e a presença de microcistinas (MCs) em animais, é importante dispor de métodos simples e de baixo custo. Como primeira aproximação a esses objetivos em peixes, Astraloheros facetus (Castañetas), expostos a uma floração de Microcystis spp, contendo microcistinas (60 e 600 µgMCs/L), foram estudados em um bioensaio subcrônico (18 dias). Embora não houve mortalidade, a histopatologia mostrou alteração tipo infiltração gordurosa no fígado, mais relevante em peixes expostos à maior concentração. Para a análise de microcistinas em tecidos, dois métodos imunoquímicos sensíveis, recentemente desenvolvidos localmente, baseados em um anticorpo de chama recombinante altamente específico (nanobody) foram otimizados: ELISA e MALDI-TOF quantitativo, usando partículas magnéticas funcionalizadas. A excelente correlação ELISA / MALDI-TOF (rSpearman = 0,988, p < 10-7) destaca o potencial desse ELISA como uma ferramenta simples e econômica, para minimizar as amostras a serem analisadas por métodos de referência. As concentrações de MCs no tecido de Castañetas foram relevantes, de acordo com bioensaios em outras espécies e peixes da natureza. Isso destaca a importância da análise de MCs em peixes para consumo.