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Optimización de una técnica de medida de disrupción endocrina por medio de Saccharomyces cerevisiae recombinantes
Autor
Keel, Karen
Míguez, Diana
Soares, Ana
Parodi, Adriana
Institución
Resumen
Endocrine disruptors are exogenous chemical substances to the organism, capable of altering the homeostasis of the endocrine- reproductive system. A group of these, estrogenic compounds, may cause negative effects on reproductive capacity of some fish, decreasing fertility, sexual ability, sperm production and feminization of males. This paper describes the analytical performance of a method for the quantitation of estrogenicity in water. The technique used was the Yeast Estrogen Screen (YES) with recombinant Saccharomyces cerevisiae, a genetically modified yeast with human estrogen receptor expression and a plasmid with the lacZ reporter gene under the control of estrogen response elements. The gene coding for β-galactosidase, which is secreted to the medium catalyzes the metabolism of a chromogenic substrate, showing a color change measure to 420 nm. The standard 17 β-estradiol was used to build a calibration curve in the range of concentrations between 1.75 ng/l and 7.5 μg/l. Sigmoid curves of dose - response obtained were fitted by the Hill function and r 2 was greater than 0.95. The method detection limit is 55 ng/l. The analyzed samples showed no detectable estrogenicity. Los disruptores endocrinos son sustancias químicas, exógenas al organismo, capaces de alterar la homeostasis del sistema endocrino-reproductivo. Un grupo de ellos, los compuestos estrogénicos, pueden ocasionar efectos negativos sobre la capacidad reproductiva de algunos peces, disminución de la fertilidad, la aptitud sexual y la producción de esperma y feminización de los machos. En este trabajo se describe el desempeno analítico de un método para la cuantificación de estrogenicidad en aguas. Se utilizó la técnica Yeast Estrogen Screen (YES) con Saccharomyces cerevisiae recombinante, una levadura modificada genéticamente que expresa el receptor de estrógenos humano y un plasmido de expresión con el gen reportero lacZ, bajo el control de elementos de respuesta a estrógenos. Dicho gen codifica para la ƒÀ-galactosidasa, que se secreta al medio y metaboliza un sustrato cromogénico, observandose un cambio de color que se mide a 420 nm. Se utilizaron estándares de 17 ƒÀ-estradiol para realizar una curva de calibración en el rango de concentraciones entre 1.75 ng/l y 7.5 ƒÊg/l. Las curvas sigmoides dosis.respuesta obtenidas se ajustaron mediante la función de Hill y los r2 fueron mayores a 0,95. El limite de detección fue de 55 ng/l. La estrogenicidad para las muestras ensayadas fue no detectable.